张杨子 王璇 吴珇彤 潘淑惠 文正常 文明

（1，贵州省畜牧兽医研究所 550001；2，贵州大学 550001）

鸭病毒性肠炎（DVE）指的是鸭肠炎病毒（DEV）引发的禽类急性、热性、败血性传染疾病，以往在多个国家流行，其给养鸭业造成了相当大的经济损失[1]。丝切蛋白（Cofilin）为一类低分子量肌动蛋白结合蛋白物质，其广泛存在于真核生物内。Cofilin 具体的活性会受到诸多因素调节，体现出与之相关的作用。结合实际情况，本文全面探究Cofifilin 在鸭肠炎病毒感染过程中的影响。

1 材料与方法

1.1 一般资料

试验应用的受精鸭蛋购买自某地养殖场。选择国家动物疫病研究室内提供的鸭肠炎病毒G Z 株为病毒菌株。自中国上海吉玛生物有限公司购买pGPH1/GFP/Neo-shNC 表达质粒。本试验所使用的试剂为胎牛血清、DMEM、胰蛋白酶、Penicillin streptomyin、Lipofectamine3000。试验所使用的主要仪器：倒置型荧光相差显微镜及与之相关成像系统、孵化机。

1.2 方法

1.2.1 Cofilin-shRNA 提取

首先，依照测序得出的鸭源的-Cofilin2 基因全序列，应用在线软件，选择鸭源Cofilin2RNA 的相关干扰性靶点，设计出相关干扰序列，送到中国上海吉玛生物有限公司完成合成工作。在shRNA 模板内的loop 结构择取TTCAAGAGA，以防止生成终止性信号，运用T6 结构为RNA 转录终止序列。并于正义链模板5’ 端增添CACC，保证其和BbsI 酶切后生成粘端互补。并在反义链5’ 端增加GATC。若siRNA 首个碱基并非G，有必要于CACC 后增加G。同时设立阴性对照小组。然后，试验应用ddH2O，把已经合成完毕的寡聚单链DNA 溶解为100μm/L。在互补型单链之内分别取用5μl，双双混合，并加入共计2μl 的10×oilgo annealing buffer。加入纯净水，直至20μl为止。此后把以上物质加热到95℃，共计5min。……