吴 雷，王玲玲

(1.吉林市中心医院，吉林 吉林 132011；2.北华大学附属医院，吉林 吉林 132011)

扁塑藤素(Pristimerin，PTM)是一种天然三萜系化合物[1]，PTM及其相关化合物具有抗感染、抗氧化以及不同程度的抑制肿瘤作用[2].相关肿瘤抑制机制包括细胞周期阻滞、蛋白酶体活性诱导细胞凋亡、线粒体功能障碍等[3]，但针对细胞线粒体膜电位的调节鲜有报道.本研究主要在体内外环境中分别探讨PTM对非小细胞肺癌的增殖和线粒体膜电位的调节作用，为明确PTM抑瘤机制提供参考.

1 材料与方法

1.1 材 料

PTM提取物、A549及H226细胞株、0.9%生理盐水(北华大学附属医院精准医学中心)；RPMI 1640培养液、优质胎牛血清、胰酶(GIBCO公司，美国)；双抗、DMSO、甲醇、溴酚蓝混合液、0.5%结晶紫、MTT(北京百泰克生物技术有限公司)；细胞线粒体膜电位检测试剂盒(北京天根生物技术有限公司)；BALB/c裸鼠(吉林大学基础医学院免疫学教研室).

1.2 方 法

1)MTT方法测定PTM作用下A549及H226细胞株的细胞存活率.按细胞浓度为10×104/mL进行MTT实验备板，待细胞贴壁生长后进行后续研究.PTM按预设浓度(0、1、2、4、8、16 μmol/L)进行分组，分别与备板细胞共培养1.5、3、6、12 h，每组设立3个复孔.应用酶联免疫分析仪在490 nm波长处测定吸光度值，得3个复孔平均值，绘制细胞存活曲线图.

2)细胞集落形成实验检测PTM对非小细胞肺癌的长期毒性作用.选择状态良好的A549和H226单细胞悬液，按1×103个/孔细胞接种于6孔板中与PTM共培养.按PTM浓度分组：0 μmol/L组(对照组)、0.1 μmol/L组、0.2 μmol/L组，设2个复孔；待肉眼可见克隆时终止培养，干燥后应用甲醇固定，0.5%结晶紫染色，倒置显微镜下记录细胞集落……