胡红刚, 张芬 (江西省医疗器械检测中心,江西 南昌 330047)

0 引言

聚酯（PET），全称聚对苯二甲酸乙二醇酯（polyethylene terephthalate），俗称涤纶树脂。它是对苯二甲酸与乙二醇的缩聚物，与PBT一起统称为热塑性聚酯，或饱和聚酯。由于PET具有良好的透明性、光泽度及阻气性的特点，被广泛用于食品、药品、医疗器械等产品的包装。PET的合成制备方法分为DMT法（酯交换法）和PTA法（直接酸法），目前，工业生产主要采用PTA法。PTA法就是用对苯二甲酸（PTA）与乙二醇在一定压力下直接酯化生成BHET，然后在催化剂作用下真空缩聚生成PET。合成过程中由于工艺条件的影响，PET成品中可能存在游离对苯二甲酸（PTA）。而对苯二甲酸（PTA）属低毒类物质，对皮肤和粘膜有一定的刺激作用。对过敏症者，接触本品可引起皮疹和支气管炎。因此，对于聚酯包装材料中对苯二甲酸（PTA）的量应严格控制[1]。

1 仪器与试剂

仪器设备：UV-2550紫外可见分光光度计（Shimadzu Corporation），岛 津LC-2010AHT液 相 色 谱 仪（Shimadzu Corporation），ClASS- VP化学工作站，DAD检测器，四元梯度泵，Sartorius BP211D精密电子天平（德国Sartorius Corporation）。

试剂试药：对苯二甲酸对照品（Acros Organics Corporation，批号：A0230131，纯度：99%以上），超纯水（去离子水经0.45 µm滤膜滤过），甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。

聚酯药用滴眼剂瓶：江西金泰医药包装材料有限责任公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Venusil MP C18色谱柱（4.6 mm×250 mm），甲醇-水（用冰乙酸调节pH为3.0）（60：40），流速：0.8 mL/min，检测波长：240 nm，柱温：25 ℃。在该色谱条件下，对苯二甲酸色谱峰与空白溶剂色谱峰分离较好，且按对苯二甲酸的色谱峰计算，理论塔板数不低于3 000[2]。

2.2 对照品及供试品溶液的制备

2.2.1 对照品储备液

精密称取对苯二甲酸对照品9.89 mg，置100 mL量瓶中，加0.1%氢氧化钠水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置50 mL的量瓶中，加0.1%氢氧化钠水溶液稀释至刻度，摇匀，即得。（浓度为9.89 µg/mL）

2.2.2 样品溶液的制备

取聚酯瓶10个，剪碎（碎片小于0.02 g），按滴眼剂瓶装量（6 mL）加0.1%氢氧化钠水溶液60 mL，超声10 min使溶解，放冷至室温，用0.45 µm微孔滤膜过滤，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 对苯二甲酸线性关系考察

取上述对苯二甲酸对照品溶液（浓度为9.89 µg/mL），分别精密吸取5、10、20、30 µL注入液相色谱仪，记录色谱图。以对苯二甲酸对照品的进样量（Cng）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，作线性回归，得回归方程：A=8 795C-3 029.3（r2= 1，n = 4），结果如表1所示。

表1 对苯二甲酸线性范围测定结果

结果表明：进样量在49.45～296.7 ng范围内呈良好的线性关系。

2.3.2 精密度实验

取上述对苯二甲酸对照品溶液（浓度为9.89 µg/mL），精密吸取20 µL注入高效液相色谱仪，连续进样5次，记录色谱图及峰面积，结果如表2所示。

表2 对苯二甲酸进样精密度测定结果

结果表明：仪器精密度良好。

2.3.3 重复性实验

取样品，共5份（每份10瓶），照2.2.2样品溶液的制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，计算样品中对苯二甲酸溶出量，测定结果如表3所示。

表3 对苯二甲酸重复性测定结果

结果表明：采用该方法测定对苯二甲酸含量，重现性较好。

2.3.4 稳定性实验

取上述对苯二甲酸对照品溶液（浓度为9.89 µg/mL），精密吸取20 µL注入高效液相色谱仪，分别于0、2、4、6、8、12 h测定一次，记录色谱图，结果如表4所示。

表4 溶液稳定性考察结果

结果表明：样品溶液的峰面积在12 h内无明显变化，说明本品溶液稳定性较好，适合常规定量分析。

2.3.5 加样回收率实验

取已知含量（1.187 µg/瓶）的同一样品5份（每份10瓶），剪碎（碎片小于0.02 g），分别精密加入0.1%氢氧化钠水溶液50 mL，然后再精密加入对苯二甲酸对照品溶液（浓度为0.989 µg/mL）10 mL，照2.2.2样品溶液的制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，计算含量，测定结果如表5所示。

表5 对苯二甲酸溶出量回收率测定结果

计算公式：

结果：采用本法测定聚酯药用滴眼剂瓶中对苯二甲酸的溶出量的回收率为98.69%～102.02%，平均回收率为100.40%，RSD=1.34%，表明测定结果准确可靠。

3 讨论

3.1 检测波长的选择

应用紫外可见分光光度计在190～400 nm波长范围内对对苯二甲酸（浓度为9.89 µg/mL的0.1%氢氧化钠水溶液）进行扫描，可以看出，对苯二甲酸对照品在238 nm的波长处有最大吸收，再结合其它参考文献资料，我们最终选择检测波长为240 nm。

3.2 空白辅料干扰实验

取0.1%氢氧化钠水溶液适量，放于适宜玻璃瓶中，按正文中供试品溶液的制备方法制得空白对照溶液，取20 µL注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明本品的空白对照溶液对对苯二甲酸的测定无干扰。

3.3 流动相与色谱柱的选择

本试验参考相关文献资料[1,2]对苯二甲酸的含量测定项下所使用的流动相，通过试验结果，发现对苯二甲酸的理论塔板数均在3 000以上，峰型也较好。此外，还对3种色谱柱进行比较，在该色谱条件下，Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm）、Zorbax SB-C18色谱柱（4.6 mm×200 mm）和Venusil MP C18色谱柱（4.6 mm×250 mm）与空白溶剂色谱峰分离度均较好，理论塔板数均在3 000以上。

3.4 提取溶剂的选择

对苯二甲酸溶于碱溶液，微溶于热乙醇，不溶于水、乙醚、冰醋酸及三氯甲烷，故考虑采用碱溶液提取。查文献资料，滴眼液一般采用氢氧化钠溶液和碳酸氢钠水溶液调节pH值，比较对苯二甲酸在0.1%氢氧化钠水溶液和0.1%碳酸氢钠水溶液的溶解度，试验结果显示，对苯二甲酸在0.1%氢氧化钠水溶液中溶解度较大（10 mg对苯二甲酸在50 mL0.1%氢氧化钠水溶液中，轻微振摇即可溶解），故最终采用0.1%氢氧化钠水溶液作为溶剂。

3.5 提取方式的选择

分别采用121 ℃湿热灭菌30 min和超声30 min两种方式进行提取，结果显示，采用这两种方式进行提取，样品中对苯二甲酸的溶出量基本一致，考虑到超声的方式操作更简便，故最终决定采用超声提取。

3.6 超声时间选择

取样品，依法分别超声10、20、30 min，结果显示，超声10 min和超声30 min，样品中对苯二甲酸的含量无明显区别，说明对苯二甲酸在超声10 min的情况下已经基本溶出，本着节约的原则，最终确定该样品超声时间为10 min。

4 结语

本研究建立了聚酯药用滴眼剂瓶中对苯二甲酸含量HPLC检测方法，该方法科学合理、可操作性强、重复性好、结果准确、易于掌握，可为生产企业和质量检测机构提供检测依据。