夏忠源，秦家骏，陈先震

(南京医科大学上海十院临床医学院神经外科，上海 200072)

慢性束缚应激模型是将啮齿类动物重复地置于束缚器具内，在一段时间内限制其行动自由来达到造模目的。尽管已有大量文献证实慢性束缚能够诱导产生抑郁样行为[1-2]，但也有报道表明随着束缚时间的延长，动物逐渐适应被束缚的状态，机体应激反应也会随之减弱[3]。慢性不可预知温和刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS),是一种经典的抑郁动物建模方法。根据CUMS原则，在每日束缚总时长不变的情况下，适当增加束缚次数更符合CUMS中的不可预知原则，或可提高建模效果并减少实验动物对刺激的适应。本研究据此假设开展实验，比较两种不同束缚频次对小鼠抑郁模型建立的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

自制可调节束缚管、悬尾装置见图1A、B；Med旷场红外追踪系统(型号：MED-OFA-RS)购自美国MED Associates公司；冰冻切片机购自德国Leica公司；激光共聚焦显微镜购自日本Nikon公司；立体定位仪购自中国深圳市瑞沃德生命科技有限公司。

AAV2/9-hSyn-CRE-EGFP-3Flag-WPRE-PA和AAV2/8-hSyn-DIO-tdTomato-WPRE-bGHpA购自上海泰儿图生物科技有限公司；兔抗Iba1、兔抗PTEN和兔抗BDNF购自Abcam公司；兔抗GAPDH购自上海雅酶生物医药科技有限公司；增强化学发光试剂显影购自默克公司；小鼠 IL-1βELISA Kit、IL-6 ELISA Kit和TNF-α ELISA Kit购自上海碧云天生物技术有限公司。

1.2 实验动物

6周龄SPF级雄性C57BL/6J 小鼠75只购自北京维通利华实验动物技术有限公司，随机分为对照(Con)组、单次束缚(constant group,CR)组和间断束缚(intermittent restraint,IR)组，每组各25只，常规饲养于同济大学医学院实验动物中心。

1.3 方法

束缚开始前所……