蒋泽敏

（贵州省平塘县农业农村局 558300）

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性病毒性传染病，主要感染小反刍动物，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征。由于小反刍兽疫发病率高、死亡率高，暴发后传播迅速，如不采取有效措施，能造成巨大经济损失，使防治工作更加复杂，因此，小反刍兽疫已成为世界各国重视的疫病之一。笔者通过ELISA方法对2020年5月至11月期间当地抽检的羊免疫血清进行了小反刍兽疫抗体检测和分析。

1 材料与方法

1.1 被检血清

2020年4月至12月由当地抽检的305份羊免疫血清，其中200份来自10个规模养羊场，105份来自10个散养户，被检血清按规模场和散养户进行小反刍兽疫免疫抗体检测。

1.2 检测试剂

小反刍兽疫病毒抗体检测ELISA试剂盒（间接法），试剂盒为无锡优联生物科技有限公司产品。

1.3 操作方法

（1）取出抗原包被板加洗涤液洗涤拍干，记录好样本的位置。（2）在血清稀释板中按1∶40稀释待检样品、1∶4稀释对照血清。（3）将稀释好的待检血清、阳性对照、阴性对照按每孔100μL加入抗原包被板中。（4）每次试验均设置阳性对2孔、阴性对照2孔。（5）轻微震荡混匀，盖上封板膜，置37℃温育30min。（6）甩掉板孔中的溶液，每孔加入洗涤液200μL，甩去孔内溶液，以上步骤重复5次，最后在干净吸水纸上拍干。（7）每孔加酶标抗体100μL，盖上封板膜，置37℃温育30min。（8）甩掉板孔中的溶液，洗涤5次，洗涤方法同（6）。（9）每孔加显色液A 50μL,再加显色液B 50μL，室温（20℃～25℃）闭光反应10min。（10）每孔加终止液50μL，10min内测定结果（对照的吸光度OD630nm）

1.4 结果判定

检测结果判定：阳性对照孔OD630nm值均应≥0.6，阴性对照孔OD630nm值均应≤0.3,实验成立，否者实验不成立。……