冯贤巧

（阳江市植保植检和种子土肥环保管理站 广东阳江529500）

柑橘黄龙病是全球柑橘产业中威胁最大的柑橘病害[1]。我国是柑橘主产国，但有9个柑橘主产省受到该病的危害，其中，广东省有24万hm2橘园，目前有1/3以上感染该病，年损失达上百亿元[2-3]。

柑橘黄龙病的病原物为韧皮部杆菌属细菌，柑橘植株被侵染后，植株生长缓慢，发病叶片常表现为均匀或斑驳黄化，而发病果实变小或畸形，常出现“红鼻子果”或果皮青绿等症状，果实品质大大降低。柑橘感病后在3～5年内死亡或丧失结果能力[4]。

不同的柑橘品种对黄龙病菌的感病性不同，本研究利用实时荧光定量PCR，对广东省阳春市马水镇4个柑橘品种多个部位上采集的样品进行检测，定量分析了柑橘黄龙病菌在柑橘病树中的分布情况，以期为黄龙病的检测和综合防控提供参考依据。

1 材料方法

1.1 样品采集

2019年9～12 月在马水镇采集病样。选择已感染柑橘黄龙病菌的4种柑橘品种马水橘、砂糖橘、贡柑和蜜柚进行采样。每个品种随机选择3棵独立的植株进行采样，分别收集新叶、成熟叶及果实的果皮、橘络、囊壁、中心柱等部位。

1.2 植物DNA的提取及柑橘黄龙病菌的检测

用去离子水将柑橘组织冲洗干净，称取200 mg柑橘组织。采用植物DNA提取试剂盒提取植物总DNA。提取的DNA样品取1μL用核酸定量仪测定浓度，其余样品保存于-20℃条件下。检测采用实时荧光定量PCR方法，引物与探针参照Li等[5]设计的引物HL-Bas/HLBr和探针HLBr，每个样品重复检测3次，取平均值。……