夏九成 龙廷 秦达念

(1攀枝花学院生物与化学工程学院，四川 攀枝花 617000；2汕头大学医学院生理教研室)

肿瘤坏死因子(TNF)-α通常是由激活的免疫系统所产生，对许多肿瘤细胞具有明显的细胞毒性，可在特定动物模型中引起肿瘤的消退。通常，TNF-α被认为是促炎性因子诱导细胞凋亡〔1，2〕。但最近却发现在特定病理及生理条件下，TNF-α的功能具有双向性，即有时诱导细胞组织的坏死凋亡，有时则是促进组织细胞的再生〔3，4〕。组织和细胞的类型、TNF-α受体的构成、TNF-α作用的时机及作用时间的长短都可以影响TNF-α在体内的作用方向和结果。TNF-α的信号传导依赖于细胞膜上两个截然不同的受体发挥作用。分别是TNF受体(TNF-R)1(55 kD)和TNF-R2(75 kD)。TNF-R1在大多数组织细胞内稳定表达，而TNF-R2主要在免疫组织和细胞内进行可调控性表达。 在多数情况下，TNF-R1是主要的TNF-α信号介导因子，可以介导各类炎症反应，从而引起机体产生病变〔4～6〕。

NG108-15细胞株是一个由小鼠神经母细胞瘤与大鼠神经胶质瘤细胞杂交后获得细胞株系〔7〕。其中，小分子化合物双丁酰环磷酸腺苷(dc-AMP)可以诱导NG108-15细胞分化形成成熟的神经元细胞。许多研究机构均采用该细胞系作为细胞模型来研究神经元的功能变化〔8，9〕。

本研究针对小鼠TNF-R1基因序列的不同区段，设计了4组候选sh-RNAi干扰序列试图敲低TNF-R1在NG108-15细胞内的表达，以确定最佳的sh-RNAi干扰序列〔10～14〕。并研究sh-RNAi干扰序列对NG108-15细胞内的阿黑皮素原(POMC)、神经肽(NP)Y、刺鼠基因相关蛋白(AGRP)神经内分泌基因是否存在干扰〔15，16〕。

1 材料与方法

1.1实验材料 NG108-15细胞系，PIPZ-1质粒载体，DH5a大肠杆菌。……