张文静，宋佳悦，赵晓蕊，张辰露，余鸿杰，张 静

(河北北方学院形态学实验室，张家口市重点实验室，河北 张家口 075000)

-非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌主要类型，约85%的肺癌为NSCLC，约75%的患者发现时已处于中晚期，预后较差[1]。细胞凋亡是基因控制的程序性细胞死亡，能够有序清除DNA发生损伤的细胞，一旦凋亡减少，可导致不受控制的细胞生长进而发展为肿瘤和肿瘤对药物抵抗[2]，凋亡失调被认为是肿瘤的标志之一[3]。有研究表明三叶因子3(trefoil factor 3,TFF3)在多种恶性肿瘤中高表达，过表达TFF3能通过抑制线粒体凋亡途径促进前列腺癌的发展[4]，TFF3高表达可以促进宫颈癌细胞的恶性进展[5]，敲除人垂体腺瘤HP75细胞中TFF3可以经由线粒体凋亡途径促进细胞凋亡，这些研究表明TFF3能够抑制细胞凋亡，促进细胞生长。通过慢病毒转染构建过表达及沉默TFF3基因A549细胞稳定细胞株，检测细胞凋亡情况及相应凋亡蛋白Bax、Bcl-2及信号通路分子Akt的表达变化，我们探讨了TFF3对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

人肺癌组织芯片(LC483、LC721)购自西安艾丽娜生物科技有限公司，人非小细胞肺癌A549(SCSP-503)细胞购自中国科学院细胞库。293T细胞、TFF3增强及沉默基因质粒、TFF3 PCR引物由河北北方学院形态学实验室提供[6]。F12K培养基、DMEM培养基、胎牛血清(Gibco)，Lenti-PacTM慢病毒包装试剂盒(广州复能基因有限公司)，Trizol、FastQuant RT Kit(With gDNase)cDNA第一链合成试剂盒(天根生化科技有限公司)，PowerUpTMSYBR®Green Master Mix(Thermo Fisher Scientific)。蛋白提取、BCA蛋白浓度测定试剂盒(北京普利莱基因技术有限公司)，小鼠抗人β-actin抗体、羊抗小鼠IgG、羊抗兔IgG、兔抗山羊IgG(康为世纪生物科技有限公司)，兔多抗Bcl-2、Bax(武汉博士德生物工程有限公司)，羊多抗Akt1/2、兔多抗p-Akt1/2/3(Santa Cruz)，兔抗人TFF3抗体(Abcam)。……