孙朋杰 张莉 杜超 李伟 卓秋琪

中圖分类号 R917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）08-0973-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.08.13

摘 要 目的：建立贝林司他中有关物质的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法检测并以加校正因子的主成分自身对照法进行计算。以ODS-AM为色谱柱，以1.02%磷酸二氢钾缓冲液（用磷酸调节pH值至3.5）-乙腈（85 ∶ 15，V/V）为流动相A、1.02%磷酸二氢钾缓冲液（用磷酸调节pH值至3.5）-乙腈（30 ∶ 70，V/V）为流动相B进行梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃，检测波长为220 nm，进样量为10 μL。结果：贝林司他及杂质A、D、F、G、H的线性范围分别为0.113～1.693、0.050～1.496、0.117～1.750、0.098～1.471、0.120～1.799、0.100～1.506 μg/mL（r≥0.999 7），后5个杂质的校正因子分别为1.0、1.0、1.2、1.5、1.0;检测限分别为0.250、0.590、0.490、0.600、0.500 ng，定量限分别为0.500、1.170、0.980、1.200、1.000 ng，回收率为90.18%～111.48%（RSD为1.52%～4.78%，n=9），稳定性（100 h）、精密度试验的RSD均不大于16%，耐用性良好。3批贝林司他原料药中检测出杂质A、D、H，含量分别为0.030%～0.038%、0.019%～0.022%、0.012%～0.013%，其他最大单体杂质含量为0.012%～0.013%，总杂质含量为0.075%～0.084%，未检出杂质B、C、F、G。结论：成功建立了测定贝林司他中有关物质含量的方法，且方法准确、专属性好。

关键词 贝林司他;有关物质;高效液相色谱法;加校正因子的主成分自对照法

Content Determination of Related Substances in Belinostat by HPLC

SUN Pengjie1，ZHANG Li1，DU Chao1，2，LI Wei2，ZHUO Qiuqi1（1. Shenzhen Wanle Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shenzhen 518000， China; 2. School of Chemistry and Biological Engineer， Yichun University， Jiangxi Yichun 336000， China）

ABSTRACT   OBJECTIVE： To establish the method for the content determination of related substances in belinstat. METHODS： HPLC method was adopted and the principal component self-control comparison method with correction factor was used to calculate the contents of related substances. The determination was performed on ODS-AM column with 1.02% potassium dihydrogen phosphate buffer （pH value adjusted to 3.5 with phosphoric acid）-acetonitrile （85 ∶ 15，V/V） as mobile phase A， 1.02% potassium dihydrogen phosphate  buffer （pH value adjusted to 3.5 with phosphoric acid）-acetonitrile （30 ∶ 70， V/V） as mobile phase B （gradient elution）， at the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was set at 30 ℃， and the detection wavelength was 220 nm. The sample size was 10 μL. RESULTS： The linear ranges of belinstat and impurities A， D， F， G， H were 0.113-1.693， 0.050-1.496， 0.117-1.750， 0.098-1.471， 0.120-1.799， 0.100-1.506 μg/mL （r≥0.999 7）. The correction factors of the last 5 impurities were 1.0， 1.0， 1.2， 1.5， 1.0; the detection limits were 0.250， 0.590， 0.490， 0.600， 0.500 ng， respectively. The quantification limits were 0.500， 1.170， 0.980， 1.200， 1.000 ng， respectively. The recoveries were 90.18%-111.48% （RSD=1.52%-4.78%， n=9）. RSDs of stability （100 h） and precision tests were no more than 16%， and the durability was good. Impurities A， D and H were detected in 3 batches of belinlestat， the contents were 0.030%-0.038%， 0.019%-0.022% and 0.012%-0.013%， respectively. The contents of other maximum monomer impurities were 0.012%-0.013% and the total impurities were 0.075%-0.084%. Impurities B， C，F， G were not detected. CONCLUSIONS： The method for the content determination of related substances in belinstat has been successfully established， and the method is accurate and specific.

KEYWORDS   Belinostat; Related substances; HPLC; Principal component self-control  comparison method with correction factor

贝林司他（结构式见图1）是一种组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂，由美国Spectrum Technologies公司和丹麦TopoTarget公司联合研发生产，主要用于治疗复发性或难治性外周T细胞淋巴瘤（PTCL）[1-5]。贝林司他于2009年被授予孤儿药地位，用于治疗PTCL;2013年，贝林司他的PTCL二期临床结果超过预期值，其新药申请于2014年2月6日被美国FDA受理，并于2014年7月3日通过审批获准上市。目前，在国内已有盛世泰科生物医药技术（苏州）有限公司和石药控股集团有限公司对其进行仿制药临床申报[6]。

临床前体外药效学研究显示，贝林司他对各种HDAC的抑制作用较好，其不仅能够提高组蛋白的乙酰化水平，还能够促进细胞凋亡;更重要的是，贝林司他可优先杀伤肿瘤细胞而非正常细胞，并可抑制纳摩尔浓度HDAC的活性[7-11]。……