贾文玉，贾晓峰，王英杰，雷雄伟

( 高台县罗城镇畜牧兽医工作站 ，甘肃 高台 734300)

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 待检材料甘肃省张掖市高台县巷道镇殷家庄村六社三个养殖场(区)的129份奶样，经无菌采集，在甘肃省张掖市高台县动物疫病预防控制中心实验室分离、培养观察后获得的18份疑似大肠杆菌纯培养物。

1.1.2 生物化培养基及试剂培养基：葡萄糖、乳糖、蔗糖、吲哚、MR、VP、硝酸盐、尿素、枸橼酸、H2S,试 剂：Ehrlich氏试剂，高硫酸钾饱和溶液、甲基红试剂、VP试剂、硝酸盐试剂。

1.2 方法

1.2.1 培养基及试剂的配制 (1)糖类分解实验(葡萄糖、乳糖、蔗糖), 用量：各配100 mL。 配方：蛋白胨0.2 g、氯化钠0.5 g、磷酸氢二钾0.02 g琼脂0.3 g、蒸馏水、pH调至7.4。加入各种糖类各1 g及质量分数为1.6%的溴甲酚紫0.1 mL。121℃高压灭菌10 min。(2)吲哚实验,用量：100 mL, 配方：Dunham氏蛋白胨水溶液：蛋白胨1 g、氯化钠0.5 g、蒸馏水150 mL，pH调至7.6,高压灭菌，晾干后于4℃保存。 高硫酸钾饱和液 高硫酸钾2.65 g，溶解于50 mL蒸馏水中。(3)甲基红(MR)、VP实验, 用量：100 mL, 配方：葡萄糖蛋白胨水溶液：葡萄糖0.5 g、蛋白胨0.5 g、磷酸氢二钾0.5 g、蒸馏水150 mL,pH调至7.2～7.6, 乙液：氢氧化钾溶液(氢氧化钾40 g，蒸馏水150 mL)。装于棕色瓶中，于4～10℃保存(4)枸橼酸盐利用实验(西蒙氏枸橼酸盐), 用量：100 mL； 配方：称取现成的西蒙氏枸橼酸盐琼脂2.98 g，解热搅拌溶解于150 mL蒸馏水中，PH调至6.7～6.9，121℃高压灭菌15 min制成斜面长5～6 cm，底长3～4 cm的斜面培养基，备用。(5)硫化氢试验(三糖铁培养基), 用量：100mL； 配方：称取现成的三糖铁琼脂(TSI)6.55 g，加热溶解于150 mL蒸馏水中，煮沸3 min，分装于16*150 mm试管，PH调至7.3～7.5，121℃高压灭菌25 min制成斜面长5～7 cm，底长4～5 cm的斜面培养基，备用。 (6)动力学检测(半固体培养基), 用量：100 mL； 配方：牛肉膏0.5 g、蛋白胨1 g、氯化钠0.5 g、磷酸氢二钾0.1 g、琼脂0.6 g，调pH至7.6，高压灭菌。……