冯立新，翟传夫，谭清玉

(临沂市中医医院 普外三科，山东 临沂 276000)

甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤，以甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)最为常见[1]。虽然相较于髓样癌和未分化癌，大部分PTC生长缓慢、侵袭性弱、分化良好，但是仍有部分患者会发生远处转移，而且由于缺乏有效的靶向治疗手段，导致预后不良。对于PTC发病分子机制的研究已经揭示了相当数量的遗传改变的参与，包括原癌基因、肿瘤抑制因子[2]、非编码RNA[3]等的发现为新靶向治疗的研究提供了新的见解。LncRNA DLG1-AS1是最近在宫颈癌中新鉴定的致癌因子[4]。通过分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas，TCGA)数据集，我们观察到DLG1-AS1在多种肿瘤组织包括PTC组织中表达上调。而且通过初步RNA测序分析表明，DLG1-AS1存在与miR-203靶向结合的互补序列。miR-203是一种在PTC组织中特异性低表达的肿瘤抑制性miRNA[5]。因此，在本研究中，我们选择PTC细胞B-CPAP为研究对象，旨在探讨lncRNA DLG1-AS1/miR-203/靶基因轴在PTC细胞恶性化生长、转移和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)中的作用，以期为PTC的诊断和治疗提供新的分子靶点。

1 材料与方法

1.1 细胞株和主要试剂

PTC细胞TPC1、KTC-1、B-CPAP、HTori-3和正常甲状腺上皮细胞Nthy-ori3-1购自中国科学院上海分院细胞库；PRMI 1640培养基和胎牛血清购自美国Gibco-BRL公司；pcDNA3.1(+)载体质粒和Lipofectamine 2000转染试剂购自美国Invitrogen公司；TRIzol Plus RNA纯化试剂和mirVana miRNA提取试剂盒购自美国Thermo Fisher Scientific公司；PrimeScriptTM RTMaster Mix逆转录试剂盒和SYBR Premix Ex Taq II试剂盒购自大连宝生生物科技有限公司；All-in-OneTMmiRNA qRT-PCR购自美国Genecopoeia公司；CCK-8溶液购自上海碧云天生物科技有限公司；胰蛋白酶、RIPA 裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒、SDS-PAGE 配胶试剂盒、免疫印迹化学发光剂 ECL购自中国碧云天公司；……