侯从岭,芦晓帆,雷小婷,李 彬,赵润杨

（河南省中医院肺病科，河南 郑州450002）

慢性阻塞性肺疾病 （chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是由肺实质变性和炎症引发的气道阻塞引起的，其发病时常伴有趋化因子、细胞因子和生长因子等炎症介质的释放［1-2］。近年来，研究［3-5］显示：微小RNAs（microRNAs，miRNAs）在多种与炎症相关疾病中发挥重要作用，其中miR-192-5p在类风湿性关节炎、骨关节炎和哮喘等疾病中异常表达。异钩藤碱（isorhynchophylline，IRN）是从茜草科植物钩藤中提取的一种四环羟吲哚生物碱，具有抗氧化和抗炎活性［6-8］，用于治疗心血管系统和中枢神经系统方面的疾病，如高血压、头痛、脑卒中和血管性痴呆等［9］。研究［10］显示：IRN通过抑制气道平滑肌细胞的增殖和促炎细胞因子的产生发挥抗哮喘作用。但IRN对COPD中人支气管上皮细胞的作用及其具体机制尚不清楚。本研究探讨IRN对肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）诱导的人支气管上皮细胞的凋亡和炎性反应的影响及其可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 细胞、主要试剂和仪器人支气管上皮16HBE细胞和HEK-293T细胞购于上海拜力生物。IRN购于上海纯优生物，TNF-α购于美国阿拉丁公司，miR-192-5p模 拟 物（miR-192-5p mimic）、miR-192-5p抑制物（miR-192-5p inhibitor）及各自阴性对照（NC mimic和NC inhibitor）以及CXCR5过表达载体（pcDNA 3.1-CXCR5）均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，DMEM高糖培养基和胎牛血清购于美国Sigma公司，Lipofectamine®2000和TRIzol试剂购于美国Invitrogen公司，TaqMan MicroRNA反转录试剂盒购于美国Thermo Fisher Scientific公司，SYBR Green PCR Master Mix试剂盒购于美国Applied Biosystems公司，CCK-8试剂盒和BCA蛋白定量试剂盒购于上海碧云天生物技术有限公司，ELISA试剂盒购于英国Abcam公司，TaKaRa反转录试剂盒、白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）、B细……