陈秀琴 林 甦 郑 敏 黄梅清＊

（1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福州 350013；2.福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心 福州 350013）

目前对食源性致病菌的检测主要是依赖传统的分离培养技术结合细菌的生物化学鉴定。这些方法耗时、费力、灵敏度低，无法定量分析食品中的食源性致病菌[2]。此外，有些致病菌无法通过培养基培养，因而结果存在假阴性的可能性[7]。近几十年来发展起来的分子生物学方法已经被广泛应用于食源性致病菌的检测，其中荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）具有特异性强、灵敏度高等优点，被认为是一种具有应用前景的方法。本研究通过选用特异性良好的靶基因来设计引物探针，建立一种检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7三种致病菌的多重荧光PCR方法，并将该方法应用于生鲜肉检测。

1 材 料

1.1 标准菌株 试验所用的16株标准菌株来源及相应的菌株编号见表1。

表1 试验用菌株

1.2 试剂和培养基 细菌基因组DNA提取试剂盒（北京TIAGEN生化科技有限公司）；2×Premix Ex Taq(Probe qPCR)试剂盒、RNase-free和pMDTM18-T载体（大连TaKaRa生物工程有限公司）；胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒（OMEGA公司）；缓冲蛋白胨水（BPW）、亚硫酸祕琼脂平板（BS琼脂）、沙门氏菌显色培养基、7.5%氯化钠肉汤、血平板、金黄色葡萄球菌显色培养基、改良EC新生霉素肉汤、普通营养琼脂培养基、大肠杆菌O157显色培养基、改良山梨醇麦康凯培养基（广东环凯微生物科技有限公司）。

1.3 主要仪器 7500荧光定量PCR仪（美国应用生物系统公司）；NanoDropND-1000核酸浓度测定仪（美国赛默飞世尔公司）；拍击式均质器(法国英特塞恩斯有限公司)。……