沈鸿伟, 李明昊, 徐 南, 邵佳琪, 王 镜, 俞 磊

（华东师范大学 化学与分子工程学院，上海 200062）

0 引 言

慢病毒载体(Lentiviral Vector, LV)是以人类免疫缺陷型病毒(HIV)为基础发展起来的基因治疗载体, 对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力, 并可以在体内长期稳定地表达[1]. 目前肿瘤免疫治疗两大主流的过继性细胞疗法包括T细胞受体(T Cell Receptor, TCR)−T 细胞和嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor, CAR)−T细胞疗法, 其中LV已被广泛应用[2−3]. CAR−T细胞生产环节中包括以携带目的基因的慢病毒载体感染T细胞, 其中慢病毒的滴度对感染是否成功非常关键. 由于慢病毒载体实质是由蛋白质和核酸组成, 这就导致了其储存条件的局限性[4]. 通常, 慢病毒载体无法在常温及4 ℃冷藏的条件下长时间保存, 其热稳定性较差, 同时反复冻融会降低其滴度, 甚至形成不同程度的降解物. 目前并没有理想的慢病毒载体冻存保护液, 这就导致常规的–80 ℃条件冷冻保存或者加入甘油保护剂也不能有效防止慢病毒载体在储存过程中滴度的降低[5−6]. 此外, 慢病毒载体在远距离运输时, 需要采取冷链运输的方式, 增加了运输成本; 即便使用较大量的干冰保护, 也有可能由于温度变化导致活性降低, 无法规避运输过程中带来的风险.

冷冻干燥(Freeze−drying或Lyophilization), 全称真空冷冻干燥, 简称冻干, 是在低温减压的条件下利用水的升华性能, 使药物低温脱水而达到干燥目的的一种技术[7]. 由于真空冷冻干燥技术在低温、低氧环境下进行, 大多数生物反应停滞, 且处理过程……