李延玲，陆蒂青，李金妞，郭杰，卢瑞杰，霍丽亚#

南阳市中心医院1感染科，2儿科，3门诊部，4感染疾病科，河南南阳473000

肝癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，在全球范围内肝癌发病率居第六位，病死率居第四位，严重威胁人民的身心健康。索拉非尼（sorafenib）是首个经美国食品药品管理局（Food and Drug Administration，FDA）批准用于临床治疗肝癌的靶向分子化疗药物，是一种多激酶抑制性药物，能够通过靶向调控多条信号通路抑制肝癌细胞增殖、新生血管生成及侵袭、转移，且疗效显著，预后效果良好。伊匹单抗是最早被美国FDA批准用于临床治疗肿瘤的免疫检查点抑制剂，可与其他化疗方案联合应用，对肝癌具有显著的治疗效果。本研究探讨索拉非尼联合伊匹单抗对肝癌细胞增殖、侵袭的影响及相关机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 细胞、试剂与仪器

HepG2肝癌细胞购自上海细胞库。DMEM培养基、胎牛血清均购自美国Gibco公司；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白浓度测定试剂盒、兔抗丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MEK）、p-MEK1多克隆抗体均购自碧云天生物技术有限公司；兔抗Raf-1、细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）1、p-ERK1及甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）多克隆抗体均购自美国Abcam公司。Multiskan FC酶标仪购自Thermo Fisher公司；ChemiDocTM XRS凝胶成像系统购自美国伯乐公司。

1.2 CCK- 8法检测细胞活力

将肝癌HepG2细胞接种于96孔板，培养24 h，设置索拉非尼组、伊匹单抗组及联合组，分别加入不同浓度的索拉非尼（5、10、15、20 μmol/L）、伊匹单抗（5、10、15、20 μmol/L）及两药（10 μmol/L索拉非尼+10 μmol/L伊匹单抗），设置空白对照组；每组设3个复孔，培养48 h，加入10 μl的CCK-8溶液，在37℃、5% CO培养箱中培养1 h，取出培养板，于酶标仪波长450 nm处测各复孔吸光度值。……