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培养液充气时间对小鼠4细胞胚胎密闭培养效果的影响

2021-06-01王丹丹谷建锋赵晓娥马保华

西北农林科技大学学报(自然科学版) 2021年5期
关键词:小鼠检测

刘 洁,王丹丹,陈 芳,谷建锋,王 兆,赵晓娥,马保华

(西北农林科技大学 动物医学院,农业部动物生物技术重点实验室,陕西 杨凌 712100)

近年来,随着一系列太空探测计划的实施和发展,空间科学研究成为各国竞争日趋激烈的领域。随着载人飞行器的诞生,空间飞行对机体的影响,尤其是对生殖系统、胚胎发育的影响是值得关注和研究的课题[1-2]。在空间胚胎发育研究中,由于空间的微重力条件,胚胎培养必须采用密闭培养的方式进行[3]。密闭培养体系须在培养前对培养液进行一次性充气,胚胎发育的氧气来源完全依赖于密闭培养体系[4]。因此,适宜的充气时间对密闭胚胎的培养至关重要。

本试验在前期对小鼠4细胞胚胎研究的基础上[5],使用气体为体积分数5% O2、5% CO2、90% N2的标准气对胚胎培养液持续充气不同时间后,进行小鼠4细胞胚胎密闭培养,通过检测密闭培养过程中胚胎过氧化物产生和缺氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factors-1α,HIF-1α)累积的情况,以及对囊胚发育率、孵化率及囊胚总细胞数进行统计,确定适宜于小鼠早期胚胎密闭培养的培养液标准气充气时间,为空间环境下哺乳动物的早期胚胎发育研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 试验动物 健康普通级昆明系小鼠(Musmusculus),购自第四军医大学实验动物中心,饲养室温度18~22 ℃,07:00-20:00日光灯人工光照,20:00-07:00黑暗,自由采食、饮水。在雌鼠体质量达到25 g左右、雄鼠体质量达到35 g左右时用于试验。

1.1.2 主要试剂和仪器 孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(hCG),宁波第二激素厂产品;……

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