苑高翔

摘要：目的：对比分析荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）与染色涂片法检测脑脊液（CSF）用于结核杆菌检测中的诊断价值。方法：样本选取80例疑似结核性脑膜炎（TBF）患者，就诊时间为2019年2月～2020年2月，取CSF标本，均行FQ-PCR检测与染色涂片法检测。结果：FQ-PCR检测阳性率高于染色涂片法检测阳性率，P<0.05;FQ-PCR法灵敏度、特异度、诊断符合率均高于染色涂片法，P<0.05。结论：FQ-PCR技术检测结核杆菌，特异性、敏感性较高，用于TBF患者诊断中具有重要价值。

关键词：FQ-PCR;染色涂片法;CFS;TBF;脑脊液

Comparison of Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction （FQ-PCR） and Staining Smear in the Detection of Mycobacterium Tuberculosis in Cerebrospinal fluid （CSF）

YUAN Gao-xiang （Taiyuan Fourth People's Hospital， ShanxiTaiyuan 030053）

Abstract： Objective： To compare and analyze the diagnostic value of fluorescence quantitative polymerase chain reaction （FQ-PCR） and staining smear in the detection of cerebrospinal fluid （CSF） in the detection of Mycobacterium tuberculosis. Methods： 80 patients with suspected tuberculous meningitis （TBF） were selected from February 2019 to February 2020. CSF samples were detected by FQ-PCR and staining smear. Results： the positive rate of FQ-PCR was higher than that of staining smear， P<0.05; The sensitivity， specificity and diagnostic coincidence rate of FQ-PCR were higher than those of staining smear， P<0.05.Conclusion： FQ-PCR has high specificity and sensitivity in the detection of Mycobacterium tuberculosis. It is of great value in the diagnosis of TBF patients.

Key words： FQ-PCR; Staining smear method; CFS; TBF; cerebrospinal fluid

结核杆菌（MTB）是常见传染性致病菌，人体感染后可能处于无症状潜伏感染状态，也可能引发进行性病变。肺外结核类疾病中，TBF发病风险较高，可致患者死亡[1]。一般而言，TBF高发于感染MTB 1年内，可能与化脓性脑膜炎、病毒性脑炎、脑肿瘤等多种疾病相混淆，具有病情进展快、误诊率高、预后不良等特征，因此早期诊断极为重要。结合临床实践分析，检测CSF内抗酸杆菌，可提升MTB检出率[2]。本文以80例疑似TBF患者探究FQ-PCR与染色涂片法检测价值。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

样本选取80例疑似结核性脑膜炎（TBF）患者，就诊时间2019年2月～2020年2月，男43例、女37例;年龄42～74岁，平均年龄（37.91±5.14）岁。TBF诊断标准：（1）培养MTB结果呈阳性。检出脑膜炎后，检测CSF，检出MTB，且脑脊液内蛋白含量提升、氯化物降低。（2）采集脑脊液标本，开展真菌、细菌检查，同时检测肿瘤细胞学，呈陰性。（3）经抗结核治疗，均好转。疑似TBF选入标准：（1）采集样本脑脊液标本，主要成分为淋巴细胞。（2）样本脑脊液比血浆葡萄糖低于0.5。（3）进行CT或MRI检查提示异常。（4）伴其他结核类疾病。（5）患者神志改变，且病程大于5d[3]。

1.2 方法

染色涂片法检测：采集脑脊液标本后，开展离心处理，随后对沉渣进行涂片染色，通过镜检观察抗酸杆菌。

FQ-PCR法检测：依据试剂盒要求进行相关操作，取500μL脑脊液标本与200μL浓缩液震匀，离心力8000*g，3min后，将上清液倒出，置入无菌生理盐水1mL，进行重悬沉淀，再次调节离心力8000×g，3min后，将上清液倒出，获取沉渣留用[4]。随后置入核酸释放剂50μL，混合均匀，随后静置2～3min。准备PCR反应液（38μL）+内标（1μL）+酶结合物（2μL）+制备好样本（5μL）置入PCR反应管中。调节反应条件，94℃环境下预变5min，随后94℃ 15s，57℃ 30s，反应45个循环调至25℃延伸10s。阴性标准：样本Ct值>39，内标呈阳性;阳性标准：样本Ct值≤39，曲线呈S形[5]。

1.3 统计学分析

采用SPSS21.0处理本文样本数据，%、（）记录疑似TBF患者资料，两组差异经χ2、t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 分析两种方案检测结果

染色涂片法检测，4例检出抗酸杆菌，阳性率5.00%;FQ-PCR法检测，检出阳性12例，阳性率15.00%。见表1。

2.2 分析两种方案检测性能

对选入80例疑似TBF样本进行CT与MRI等影像学检查与CSF生化检查，同时结合临床症状分析，15例确诊为TBF。计算两种检测方案灵敏度、特异度与诊断符合率，可见FQ-PCR法均高于染色涂片法。见表2。

3讨论

临床诊断TBF患者，多结合CSF检查、临床症状及CT、MRI等影像学诊断综合分析，检测CSF时，涉及学科较多，包括病原学、免疫学与细胞学等，诊断难度较高[6]。由于TBF病情较重，因此发病后需尽早诊断，以改善TBF患者预后[7]。临床诊断结核类疾病金标准为培养MTB，检出结果准确可靠，但检测时间过长，受检者需4～8周方可取得检测结果，具有较高特异性。此外，培养MTB仅活菌可被培养，限制了结核类疾病初期诊断，不利于早期治疗。近年来，FQ-PCR技术快速发展，具有灵敏度、特异度高等优点，已广泛用于病原体检测中[8]。

结核本实验结果分析，60例疑似TBF开展染色涂片法检测，4例检出抗酸杆菌，阳性率5.00%;开展FQ-PCR法检测，12例呈阳性，阳性率15.00%。FQ-PCR法检测阳性率高于染色涂片法，P<0.05。对选入疑似TBF样本进行CT与MRI等影像学检查与CSF生化检查，同时结合临床症状分析，15例确诊为TBF，可计算FQ-PCR法检测灵敏度、特异度、诊断符合率均高于染色涂片法检测。FQ-PCR法阳性率较染色涂片法高，可能与PCR敏感性过高有关，在检查期间受感染影响，出现假阳性，导致FQ-PCR法检出阳性率高于染色涂片法[9]。但本文数据中，FQ-PCR法检出阳性患者与临床确诊病例相符，可见FQ-PCR检测具有重要价值。

综上所述，虽FQ-PCR技术不可取代传统方案成为检测结核类疾病金标准，但随着FQ-PCR技术不断成熟，已成为诊断MTB重要方案，具有检查周期短、灵敏度高等优点，适用于不典型病例或传统方案无法检出病例检查中，具备临床推广价值。

参考文献

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[2]张加林，杨林娴.实时荧光定量PCR在肺结核诊断中的临床应用[J].农家科技旬刊，2018，3（6）：87-87.

[3]许慧娇.抗酸染色法与荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用[J].心理月刊，2019，14（22）：166-166..

[4]季雪兰.荧光定量PCR法与直接涂片抗酸染色法检测结核杆菌结果对比[J].国际感染杂志（电子版），2019，8（2）：177-178.

[5]吕纯芳，吴健虹，卢留珠，etal.国产实时荧光定量PCR试剂与GeneXpertMTB/RIF检测结核分枝杆菌的对比分析[J].中国防痨杂志，2020，42（1）：60-65.

[6]李乔，吴健，陈泽城.实时荧光定量多聚酶链反应扩增技术联合浓缩涂片染色法快速诊断结核病的效果[J].当代医药论丛，2021，19（15）：139-140.

[7]金娴，樊春卉，谭萍，等.细菌培养法与荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）对妊娠晚期B族链球菌筛查的应用价值比较[J].生物医学工程学进展，2021，42（2）：97-99.

[8]季雪蘭.荧光定量PCR法与直接涂片抗酸染色法检测结核杆菌结果对比[J].国际感染病学：电子版，2019，8（2）：177-178.

[9]袁瑛，明湘虹，郑宏，等.SAT技术与荧光定量PCR在痰涂片阴性肺结核诊断中的价值研究[J].临床肺科杂志，2019，24（3）：538-540.