郑少烈， 李若玢， 高绿芬， 高雪松， 李囡， 王晓玉

(暨南大学 附属第一医院 妇产科， 广东 广州 510632)

卵巢癌的复发耐药问题，一直是影响患者生存期及生活质量的主要原因.细胞周期阻滞能够促进突变DNA的修复以及异常细胞分裂的逆转，为人体恶性肿瘤的重要监控机制之一.p53在调控细胞周期阻滞过程中发挥着十分重要的作用，肿瘤耐药的产生与p53功能的失调关系密切.淫羊藿素(ICT)作为传统补益中药，具有抗癌谱广、逆转化疗耐药、调节免疫力等特点.本实验通过建立细胞周期同步化模型，研究淫羊藿素影响不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞株周期阻滞的作用途径及机制，为复发耐药性卵巢癌治疗药物的研发提供新思路.

1 材料与方法

1.1 实验细胞

三株p53不同分型人卵巢癌细胞株p53野生型C13*、p53变异型A2780cp、p53缺失型SKOV3，由渥太华大学细胞与分子医学系Tsang Ben教授课题组馈赠[1-2]，储存于暨南大学附属第一医院中心实验室.

1.2 主要试剂

淫羊藿素购自广州杰特伟生物有限公司，胸腺嘧啶核苷酸(TdR)购自Sigma公司，PRMI-1640培养基、质量分数为0.25%胰酶/质量分数为0.02%EDTA、青-链霉素、胎牛血清均购自GIBCO公司，二甲基亚砜(DMSO)、碘化丙啶(PI)、吐温20(Tween-20)均购自Sigma公司，甲醇、无水乙醇均购自广州化学制剂厂，苯甲基磺酰氟(PMSF)、RIPA裂解液、ECL 发光试剂盒、SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒、SDS 上样缓冲液、anti-GADPH(鼠单克隆抗体)、二抗(抗兔或抗鼠)、一抗二抗去除液(强碱性)均购自碧云天生物技术公司，anti-CyclinE(兔多克隆抗体)、anti-CyclinB1(鼠单克隆抗体)、Anti-CHK1(鼠单克隆抗体)、Anti-p53(鼠单……