刘乃榕，李景辉，任刚，李晶，詹杰

阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)是一种中枢神经神经系统退行性疾病。临床以进行性记忆及认知障碍，伴精神及行为异常为主要特征，目前病因迄今未明，尚无有效治疗手段[1]，是影响全球公共健康的重大问题[2]。目前已知AD具有两大病理特征，β淀粉样蛋白(amyloid-β，Aβ)沉积形成的细胞炎斑和tau蛋白过度磷酸化形成神经细胞内神经原纤维缠结，典型的细胞炎斑核心是Aβ，Aβ沉积被认为是AD始发因素。研究发现AD具有高度遗传性，目前全基因组关联研究已发现20多个AD风险基因。营养作为细胞分裂、增殖和代谢的物质条件，伴随着生命从孕育到终结的全过程。相对于遗传学缺陷，表观遗传性疾病有可能通过生命早期的营养干预而发生逆转，影响AD风险基因的表达。

研究显示，成人体内缺乏B12可引起血浆Hcy浓度升高，导致AD发生。本试验以维生素B12不同剂量对新生大鼠海马神经元进行早期干预，对比观察维生素B12早期干预对DNA甲基化以及海马神经元成熟后对Aβ毒性作用的反应，从细胞水平分析生命早期补充维生素B12对AD发病的保护机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康SPF级SD大鼠20只(雌鼠15只，雄鼠5只)，体质量300～350 g，由辽宁长生生物技术有限公司提供[许可证编号：SCXK(沪)2012-0002]。

1.2 实验药品及试剂 维生素B12(Sigma公司)；脱氧胞苷(deoxycytidine,dC)标准品、5-甲基脱氧胞苷(5-methyl-deoxycytidine，5-mdC)标准品；Aβ1-42、rat TFA(MCE)；AnnexinⅤ/PI凋亡试剂盒(达科为)；DNA提取试剂盒、蛋白质定量试剂盒(BCA法，天根)；四甲基偶氮唑盐(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，MTT)(Amresco公司)；丙二醛试剂盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-PX)试剂盒(南京建成生物公司)。……