洪 昊， 李 昭， 董念国△

1华中科技大学同济医学院附属协和医院心脏大血管外科，武汉 4300222阜外华中心血管病医院心血管外科，郑州 451464

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)是主要存在于骨髓组织中具有多向分化潜能甚至横向分化潜能的一种成体干细胞，由于其取材方便、创伤较小，体外增殖能力强，易于外源基因转染和表达，自体移植不易发生免疫排斥反应，几乎无伦理学问题等优点，已经成为细胞治疗、再生医学、器官移植等领域的研究热点[1]。尽管关于BMSCs生物学特性的研究越来越多，但因其缺乏特有的表面标记分子，使得分离、筛选和鉴定较为困难，目前常用方法如密度梯度离心法、差速贴壁筛选法等均不能很好地满足实验要求。此外，BMSCs在骨髓中的含量极低，只有不到0.05%的骨髓细胞能表现出BMSCs的特性，很难满足组织工程研究的需要[2]。因此，建立对其进行有效分离、筛选和鉴定的方法极为重要。本研究采取指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)[1]，获得大鼠BMSCs的特异性核酸适配子(aptamer)，从大鼠骨髓细胞中快速分离和筛选出BMSCs，并对核酸适配子与大鼠BMSCs的结合方式及能力进行鉴定，为其进一步应用于组织工程，招募、捕获靶细胞提供新的思路和方法。

1 材料与方法

1.1 主要材料

DMEM低糖培养液(美国Hyclone)，胎牛血清(美国Gibco)，0.25% EDTA-Trypsin(美国Gibco)，青霉素-链霉素双抗(美国Gibco)，BSA(美国Sigma)，抗大鼠CD29、CD31、CD45、CD90抗体(美国Abcam)，DNA文库、上游引物、下游引物、FAM-上游引物、Biotin-下游引物(美国Invitrogen)，HiFi SuperMix(日本TaKaRa)，100 bp DNA ladder(日本TaKaRa)，DNA产物纯化试剂盒(日本TaKaRa)，琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(日本TaKaRa)，TA克隆试……