孟祥伟， 郑 峰

1青海大学研究生院，西宁 8100162 青海省人民医院骨科，西宁 810007

组织工程技术是近年来兴起的骨缺损修复手段，干细胞是组织工程技术中重要的种子细胞，具有自我更新和多向分化的潜能，在特定条件下能够向成骨细胞分化并对骨缺损进行修复[1-2]。脂肪干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells，ADSCs)是组织工程领域常用的间充质干细胞，从脂肪组织分离得到，具有来源广泛、生物相容性良好等优势，能够向成骨细胞分化，但调控ADSCs成骨分化的机制尚不十分清楚，这也限制了ADSCs在骨缺损修复中的应用价值。

微小RNA(microRNA，miR)是近年受到越来越多关注的一类非编码小分子RNA，在转录后水平调控基因表达，进而在细胞增殖、凋亡、分化等多个生物学环节中发挥调控作用。多项组织工程相关的研究证实，miRs对ADSCs、骨髓间充质干细胞等的成骨分化、成脂分化具有调控作用[3-5]。另有一项关节软骨的相关研究表明，miR-95-5p对间充质干细胞的软骨分化具有调节作用[6]，但miR-95-5p在干细胞成骨分化中的作用未见报道。经前期生物信息学分析，miR-95-5p对成骨过程中的关键调控基因骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2，BMP2)具有靶向调控作用。在此基础上，本实验以ADSCs为对象，具体分析了miR-95-5p靶向BMP2调控ADSCs成骨分化的作用及机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 动物 雄性C57BL/6小鼠购自上海杰思捷实验动物有限公司，体质量18～25 g，生产许可证号SCXK(沪)2018-0004。

1.1.2 试剂 Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶购自Gibco公司；阴性对照(negative control，NC)mimic，miR-95-5p mimic购自上海吉玛公司；转染试剂Lipofectamine2000、流式细胞术试剂盒及CD44、CD90、CD105、CD45抗体购自Thermo公司；地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C、茜素红购自Sigma公司；……