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虚拟结构光照明双光子荧光显微成像

2021-05-18邵永红郑晓敏吴文帅陈嘉杰

深圳大学学报(理工版) 2021年3期
关键词:结构

邵永红,郑晓敏,汪 磊,吴文帅,周 洁,陈嘉杰

深圳大学物理与光电工程学院,光电器件与系统教育部/广东省重点实验室,广东深圳 518060

荧光显微成像已广泛用于生物医学研究,然而由于光学衍射系统的限制,可达到的最小分辨距离约为200 nm.为提高光学系统分辨率,出现了一系列新型超分辨技术,如受激发射损耗(stimulated emission depletion, STED)荧光显微技术、随机光学重建显微技术(stochastic optical reconstruction microscopy, STORM)和结构光照明显微成像技术(structured illumination microscopy, SIM)[1-5].STED技术将系统分辨率大幅提高至远高于衍射极限分辨率水平(几十nm或更高),但所需的高功率受激辐射耗尽激光对生物样品(特别是活细胞)损伤较大,因此,不适于活细胞动态成像.STED技术必须使用特殊STED染料,这限制了样品的范围.STORM技术的横向和轴向分辨率分别可达到高于20 nm和50 nm的水平,但重构一幅超分辨图像需要采集平均数万张原始图像,限制了成像速度.STORM技术还需要具有开关效应的荧光探针,对染料要求较高,限制了其适用范围.SIM技术可将成像分辨率提高近2倍,且不需要特殊染料和高功率激光,光学系统相对简单,便于与其他系统兼容,成像速度快,有利于活细胞成像[6-7].

在结构光超分辨成像技术中,采用光栅投影或双光束干涉形式,在样品中产生强度正弦调制的结构光图案,利用结构光与样本频谱的卷积作用,将不可探测的高频信息转化为可探测的低频信息,通过相移算法重构超分辨图像.为了解这些已被混频的高频信息,需获取不同相位下结构光……

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