耿兵 臧云飞 王照红 李福伟 赵东晓 董亚茹 高金波

摘  要：为了探明桑叶多糖对雏鸡免疫功能的影响，本研究采用超声波辅助水提法，辅以离子交换柱层析对其纯化，得到两种不同分子量的桑叶多糖组分（ MLP-I、MLP-II） 。将两种多糖分别以0.5%的剂量添加到雏鸡的基础日粮中。结果表明，桑叶多糖可以显著提高雏鸡免疫器官指数，能够显著促进细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌，MLP-II的免疫增强效果优于MLP-I。本研究为桑叶多糖的开发利用提供了技术支撑和理论依据。

关键词：桑叶多糖;雏鸡;免疫

中图分类号：S816.75    文献标识码：B    文章编号：1673-1085（2021）2-0010-04

多糖是普遍存在于植物体内的生物学大分子物质，具有提高机体免疫力、抗病毒、抗肿瘤、抗炎等一系列作用，近年来关于植物多糖的研究较为广泛。桑叶是桑科多年生落叶小乔木桑树（Morus alba L.）的叶，中医又称“铁扇子”[1]，桑叶中含有植物甾醇、黄酮类、生物碱类、多糖等功能性活性物质，其多糖成分具有提高动物机体免疫力、抗氧化 、降血糖、降血脂、抗高血压、抗炎和血管舒张剂等多种生物活性[2-7]。侯瑞宏等研究发现，桑叶多糖（MLP）对小鼠的体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、细胞免疫功能等均有显著性的影响，说明MLP具有免疫调节功能[8]。因此，本研究将桑叶经提取、分离、纯化得到两种不同分子量的多糖组分（MLP-I、MLP-II），并将两种不同的多糖组分作用于雏鸡，探讨桑叶多糖对雏鸡免疫功能的影响，为桑叶多糖在家禽养殖上的应用提供理论依据。

1  材料和方法

1.1  材料  细胞因子IL-2和IFN-γ的ELISA检测试剂盒购自江苏晶美生物科技有限公司;200只1 d海兰褐公雏，购自于海阳鸿牧种禽有限公司;酶标仪（ELX800），美国 Bio-Tek 宝特公司产品;台式离心机（TGL-16G），上海安亭科学仪器制造厂生产;超声波清洗浴（KQ-2200DB），昆山股份有限公司生产;其它试验所用化学试剂均为国产分析纯。

1.2  桑叶粗多糖的提取  采用超声波辅助水提法，具体步骤如下：新鲜桑叶在真空烘箱中60 ℃烘干，研磨过80目筛， 制成桑叶干粉。纯净水为溶剂，料液比1∶20，超声波功率为50 W，85 ℃提取时间2.5 h[9]，将滤液在真空下利用旋转蒸发器在50 ℃下浓缩，无水乙醇沉淀，真空冷冻干燥，得到的粉末即为桑叶粗多糖。

1.3  桑叶多糖的纯化  将粗制MLP溶解于10 mL蒸馏水中，通过0.45 mMMPs膜过滤。滤液通过DEAE-52纤维素阴离子交换柱（26 mm×500 mm）。洗脱液为0.1 mol/L NaCl，流速为1 mL/min。洗脱液的总糖含量用苯酚-硫酸法测定。NaCl洗脱的馏分在Sephadex G-100凝胶柱上以0.5 mL/min的速度洗脱，洗脱峰的洗脱液装入透析袋中进一步纯化浓缩，最后经乙醇沉淀、真空冷冻干燥得到纯化多糖[10]。

1.4  试验动物及分组  将200只1 d海兰褐公雏饲养至7 d后选取150只，随机分为3组（MLP-I组、MLP-II组和空白对照组）。试验组在雏鸡的基础日粮中添加0.5%的桑叶多糖。常规饲养管理，各组的饲养条件、饲养方法等均一致。试验期56 d，预试期5 d。

1.5  检测指标和方法  试验56 d时，每组随机选取30只试验鸡心脏采血，分离血清检测免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白介素2（IL-2）和γ-干扰素（IFN-γ）含量;禁食12 h后称重、屠宰，取胸腺、脾脏、法氏囊和肝脏等免疫器官，吸干表面液体、除去多余脂肪，称其鲜重，计算免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官鲜重（g）/宰前空腹活重（kg）。

1.6  数据分析  数据采用 Microsoft Excel 2007 和SAS （Version 8e，SAS Institute，1998）软件进行统计分析。试验数据以“平均值±标准差”表示，P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。

2  结果与分析

2.1  桑叶多糖的分离提纯  苯酚-硫酸法检测结果表明，桑叶多糖的提取率达到8.83%，多糖的纯度为86.97%。用葡聚糖凝胶柱Sephadex G-100层析纯化桑叶多糖，得到两种多糖组分，分别命名为MLP-I、MLP-II，如图1所示。

2.2  MLP对雏鸡免疫器官发育的影响  结果见表1。

由表1可见，两种桑叶多糖组分可以显著提高雏鸡胸腺指数和法氏囊指数（P<0.05），MLP-II效果优于MLP-I，两种多糖对雏鸡脾脏指数和肝脏指数没有显著影响（P>0.05）。

2.3  MLP對雏鸡血清中细胞因子的影响  检测结果见表2。

由表2可见，两种桑叶多糖组分对雏鸡血清中免疫球蛋白IgG、IgM的分泌没有明显的促进作用;MLP-II、MLP-I均可显著提高血清中IL-2和IFN-γ的含量（P<0.05）。

3  讨论

多糖是桑叶中的重要活性物质，具有显著的抗氧化、增强免疫力等功能[11]。多糖主要是利用其结构相似性和受体结合发挥生物活性，调节免疫器官释放相关细胞活性因子，进而提高机体免疫力[12]。胸腺和法氏囊是家禽重要的免疫器官，是多种免疫活性因子分泌的主要部位[13]，免疫器官的发育状态与免疫功能密切相关。Ravis等人报道称免疫器官指数可以用来评价机体免疫水平，较大的免疫器官重量通常在一定程度上代表着较强的免疫功能[14]。因此免疫器官指数常用来评价家禽的免疫水平[15]。

本研究纯化的桑叶多糖组分MLP-II、MLP-I对胸腺和法氏囊的发育均具有促进作用，说明桑叶多糖对雏鸡的免疫具有促进作用。这与目前的研究结果相似，陈洪亮[16]研究结果表明，黄芪多糖、牛膝多糖、芦荟多糖能够显著提高肉鸡的法氏囊指数;李维[17]研究结果表明，桑叶多糖能够有效增强小鼠的机体免疫力;张燕等[18]研究结果发现白毛藤多糖能够显著提高三黄鸡雏鸡的免疫器官指数。

血清中IL-2、IFN-γ也是反映机体免疫功能的重要指标。本研究结果表明，日粮中添加桑叶多糖可显著提高雏鸡血清中IL-2和IFN-γ含量，通过提高细胞免疫因子增加机体血液屏障功能，从而提高机体的免疫防御。这与Chen等[10]研究结果相似，即桑叶多糖能显著促进小鼠空肠和气管分泌IL-2、IFN-γ和SIgA，促进盲肠扁桃体IgA+细胞的产生，增强肠道和气管粘膜免疫功能;Fan等[19]将淫羊藿多糖作为疫苗免疫佐剂，发现淫羊藿多糖能够最有效地促进IFN-γ和IL-6 的分泌。说明多糖能够通过增加细胞因子分泌，可能激活了相关免疫应答通路，进而提高机体免疫水平。

4  结论

本研究采用超声波辅助水提法提取桑叶多糖，利用凝胶柱子层析得到两种不同分子量的桑叶多糖组分MLP-I、MLP-II，并分析其对雏鸡的免疫功能影响，发现MLP-I、MLP-II均可以显著提高雏鸡的免疫功能，MLP-II的效果好于MLP-I，为继续开发利用桑叶多糖奠定了理论基础。

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Effects of dietary mulberry leaf polysaccharides

on immune function of chicks

GENG bing1， WANG zhaohong1， LI fuwei1， ZHAO dongxiao1， DONG yaru1， GAO jinbo1，2*

（1.Shandong Sericulture Research Institute，Yantai 264002， China;

2.Institute of Poultry Research，Shandong Academy of Agricultural Sciences/Shandong Poultry Breeding and Engineering Technology Research Center， Jinan 250100， China）

Abstract：In order to find out the effect of mulberry leaf polysaccharides on the immune function of chicks， ultrasonic-assisted water extraction and ion exchange column chromatography were used to purify mulberry leaf polysaccharides， and two kinds of mulberry leaf polysaccharides with different molecular weight （MLP-I and MLP-II） were obtained. The two polysaccharides were added to the basal diet of chicks at a dose of 0.5% respectively. The results showed that mulberry leaf polysaccharides could significantly increase the immune organ index of chicks and significantly promote the secretion of cytokines IL-2 and IFN- γ. The immune enhancement effect of MLP-II was better than that of MLP-I. This study provides technical support and theoretical basis for the development and utilization of mulberry leaf polysaccharides.

Keywords： Mulberry leaf polysaccharides;chicks;immunity□