TBBPA-DHEE暴露对斑马鱼的神经毒性及机制研究
2021-05-14徐彤冯伟伟丁阳阳钱显陈瑶茆广华仰榴青吴向阳
徐彤, 冯伟伟, 丁阳阳, 钱显, 陈瑶, 茆广华, 仰榴青, 吴向阳
(江苏大学1. 环境与安全工程学院; 2. 化工学院, 江苏 镇江 212013)
四溴双酚A(Tetrabromobisphenol A, TBBPA)是目前使用最为广泛的一种溴代阻燃剂,各种环境介质如土壤、水体、大气及生物体中均可检测到。已有研究表明,TBBPA可通过干扰神经相关激素、神经递质分泌和神经相关信号通路产生神经毒性[1]。TBBPA的部分结构与甲状腺激素相似,进入生物体血液后可扰乱甲状腺激素分泌,导致内分泌紊乱并进一步造成神经元损伤[2]。四溴双酚A双(2-羟基乙基)醚[TBBPA bis(2-hydroxyetyl) ether,TBBPA-DHEE]是TBBPA典型的衍生物之一,广泛用于生产工程聚合物、涂料、热塑性聚酯及聚苯乙烯泡沫等材料,已在水体、土壤等环境介质中检出[3-4]。其结构与TBBPA母体高度类似,是否具有类似的毒理学效应尚不清楚。研究发现,TBBPA-DHEE对大鼠嗜铬瘤细胞、新生大鼠均具有神经毒性[5-6],而对水生动物的影响尚不清楚。因此,本文以斑马鱼胚胎为研究对象,通过对胚胎发育相关指标、行为学指标、酶学指标及Ca2+信号通路相关mRNA表达的分析,系统研究TBBPA-DHEE暴露对斑马鱼胚胎的神经毒性,并探明潜在的作用机制。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
主要试剂:TBBPA-DHEE标准品(纯度98%)购于美国Sigma-Aldrich公司,其余试剂购于国药集团,均为分析纯;RNA提取试剂盒(日本TaKaRa公司);逆转录试剂盒(美国Bio-Rad公司);引物序列由上海生工生物工程股份有限公司设计。
主要仪器:体式荧光显微镜(日本Olympus公司);超低温冰箱(日本Panasonic公司);组织匀浆器(德国IKA公司);电子天平(德国Sartorius公司);超微量核酸蛋白测定仪(美国Thermo公司);……