张杨子 王璇 吴玙彤 潘淑惠 文正常 文明

摘要：本试验旨在研究鸭肠炎病毒（DEV）gD蛋白亚细胞定位及其对病毒感染的相关作用。本研究经过对DEV病毒扩增处理，利用原核表达系统获得重组gD基因胞外区蛋白（gDw），以兔抗gDw IgG为抗体，进行免疫荧光反应，对比病毒对照组，检查gD蛋白在吸附、侵入以及传播之间起到的作用。结果表明，经过荧光显微镜观察，接种DEV后4h可见绿色荧光，主要在细胞核附近。持续观察6～24h发现荧光随着时间增加明显加强，细胞轮廓清晰，主要存在于胞浆中。激光显微镜下观察接种DEV后4h可观察到绿色荧光，经过PI染色12h后可见绿色荧光更加明显，主要在胞浆中呈现，在胞核内没有出现特异性荧光。染色后72h可在细胞膜上观察到绿色荧光，且轮廓清晰。添加兔抗gDw IgG不会影响病毒粒子吸附率，在病毒粒子吸附中糖蛋白D并未产生明显作用。观察组吸附率和噬斑数与对照组有显著差异（P<0.05），添加兔抗gDw IgG后可有效降低病毒粒子侵入DEF，糖蛋白D具有阻止病毒侵入DEF的作用。添加兔抗gDw IgG后病毒噬斑直径明显减小，证实了在DEV细胞之间传播过程中糖蛋白D起到抵抗作用。DEF感染DEV后2h可检查到gD基因转录，经过免疫荧光实验，4h后可合成gD蛋白，出现在核膜和核周，12h出现在胞浆上，72h出现在细胞膜上。DEVgD参与病毒侵入以及细胞之间传播的作用，对于病毒吸附不明显，添加gDw Igw抗体后，细胞病变具有延迟反应。

关键词：鸭肠炎；病毒gD蛋白；亚细胞定位；病毒感染作用

鸭肠炎即鸭瘟，是由鸭肠炎病毒（DEV）引发的禽类感染传染病，具有较强的传染性，发病急，死亡率高[1]。一般情况下，禽类感染潜伏期约为3～5d，患病鸭表现出爱独处，头颈卷缩，双脚麻痹，羽毛松乱，不愿意行走。随着病情恶化开始腹泻，排泄物呈白色或绿色，有腥臭味，食欲减退、肛门红肿[2]。经过解剖，患鸭出现体腔积血以及组织出血，存在器官坏死。gD蛋白亚细胞是病毒传播的重要蛋白，具有中和病毒作用，作为一种中和抗原，能够诱导保护反应，鸭肠炎疫苗就是通过将病毒结构蛋白作为抗原免疫，从而达到预防作用。……