李 冰，段宏宇，李玉梅，郝一鸣

（内蒙古包钢医院心血管内科，内蒙古包头 014010）

心肌梗死是由于心脏冠状动脉等主要血管堵塞或狭窄导致的心肌组织缺血、低氧、营养物质供应不足、代谢产物清除减少，从而造成心肌细胞凋亡、心肌组织坏死的心血管疾病［1-3］。而心肌梗死最有效的治疗方法是修复心肌梗死后心肌组织，改善其循环作用［4］。替罗非班是一种重要的血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa抑制剂，能够有效强化抗血小板治疗，改善冠状动脉血流和心肌灌注，显著降低手术治疗后的主要不良心血管事件的发生率。本研究构建氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation，OGD）心肌细胞损伤模型，通过测定胞外炎症水平及过氧化物水平，观察替罗非班对损伤心肌细胞的修复效果及氧化应激信号蛋白磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）的变化，初步探索替罗非班对受损心肌细胞功能修复的作用机制。

1 材料和方法

1.1 主要试剂

大鼠心肌细胞H9C2购自中国科学院细胞库；替罗非班购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；LY294002抑制剂购自APExBIO；活性氧（reac⁃tive oxygen species，ROS）检测试剂盒购自Beyotime；乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）测定试剂盒购自南京建成；磷酸化（phosphorylation，p）-AKT兔抗购自Abcam（Ab38449，稀释比例为1∶1 000）；兔抗鼠PI3K购自Abcam（Ab191606，稀释比例为1∶1 000）；兔抗鼠p-PI3K购自Abcam（Ab182651，稀释比例为1∶1 000）；兔抗鼠p-AKT购自Abcam（Ab38449，稀释比例为1∶1 000）；丙二醛（malondi⁃aldehyde，MDA）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素（interleukin，IL）-6、心房利钠肽（atrial natriuretic peptide，ANP）和脑钠肽（brain natriuretic peptide，BNP）酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒购自Bioswamp；兔抗鼠AKT购自Bioswamp（PAB34089，稀释比例为1∶1 000）；山羊抗兔IgG羊抗购自Bioswamp（SAB43711，稀释比例为1∶10 000）。

1.2 氧糖剥夺造模

收集H9C2细胞，分布于6孔板中，5×105个/孔，每孔2 mL，用DMEM正常条件培养24 h，使细胞贴壁。……