张现莉

平邑县人民医院检验科，山东 临沂 273300

原发性肝癌在我国有很高的发病率，致病因素有肝组织受损、机体免疫机能失调等，很多研究表明，肿瘤细胞的免疫逃逸及其反击机制、正常肝细胞与免疫细胞作用机制异常均起着重要作用[1-2]。相关研究发现，自然杀伤细胞(NK细胞)对于肝癌细胞具有非特异性杀伤效应，而CD8+T细胞、辅助性和调节性T细胞有可能通过影响NK细胞的自然杀伤作用可引起肝癌细胞发生免疫逃逸，从而导致肝癌组织的增殖、转移[3-4]。本研究通过观察28例原发性肝细胞癌患者、29例慢性肝硬化患者、31例健康成人外周静脉血中T细胞及NK细胞的水平，探讨T细胞、NK细胞水平与原发性肝细胞癌的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2018年7月—2020年2月就诊于平邑县人民医院的28例原发性肝细胞癌患者，男性15例，女性13岁；年龄57～71岁，平均(65.7±6.9)岁；所有患者均经肝穿刺细胞学检查及B超、MRI等确诊[5]且未伴有明显基础疾病；半年内未使用影响免疫功能的药物。29例慢性肝硬化患者，男性17例，女性12岁；年龄54～73岁，平均(64.3±8.1)岁；无明显基础疾病。31例健康成年人，男性16例，女性15岁；年龄58～ 75岁，平均(67.4±5.8)岁。三组病例在性别、年龄等方面的差异无统计学意义[Fisher精确概率法P性别=0.856(P>0.05)；F年龄=0.117，P年龄=0.926(P>0.05)]。

1.2 方法

三组病例分别采集200 μl肘静脉外周血，随即添加20 μl 对应抗体，半小时后，1200 r/ min 下离心10 min，倒去上清液，轻柔洗涤至少3次后，采用全自动流式细胞仪检测，最后分析。

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 三组患者外周血T细胞及NK细胞的水平比较情况

原发性肝癌患者外周静脉血中，CD3+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞水平明显低于慢性肝硬化患者和健康成人，差异具有统计学意义(P﹤0.05)；CD8+T细胞水平明显高于慢性肝硬化患者和健康成人，差异具统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 不同肝癌分期患者外周血T细胞及NK细胞的水平比较

原发性肝癌患者外周静脉血中，Ⅰ期、Ⅱ期患者CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T、NK细胞水平比较并无明显差异(P>0.05)；Ⅲ期患者CD3+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞水平明显低于Ⅰ期、Ⅱ期患者，CD8+T细胞水平明显高于Ⅰ期、Ⅱ期患者，差异具统计学意义(P﹤0.05)。见表2。

表2 不同肝癌分期患者外周血T细胞及NK细胞的水平比较

3 讨 论

T细胞和NK细胞参与人体的免疫过程，机体的免疫机能失调、淋巴因子的平衡紊乱，很可能与原发性肝癌及肝硬化有关[6-7]。在体外，NK细胞可以高效地杀伤肿瘤细胞及其他有害物质，但其在体内却未能实现有效的抗肿瘤作用；一般而言，肿瘤组织内的NK细胞可通过外源性和内源性两种方式实现，但很多肿瘤并不是只有一种细胞浸润方式，所以更好地研究NK细胞如何介导杀伤肝癌细胞，才能在细胞免疫水平抑制肿瘤组织。T细胞也在肿瘤免疫中有重要作用，CD4+与 CD25+属于调节性T小细胞，虽然在外周静脉血的T细胞中占很小比例，但其对于调节肝癌细胞进行免疫逃逸起重要作用[8-9]。

原发性肝细胞癌患者体内CD4+、 CD8+的水平明显降低，原因可能在于患者由于自身免疫功能受破坏，IL-2介导的T细胞亚群数量不足或免疫功能存在缺陷；IL- 2与T细胞的相互影响形成恶性循环，加重了免疫功能降低[7]。本研究中，原发性肝癌患者CD3+T细胞、CD4+T细胞水平低于慢性肝硬化患者及健康成人，CD8+T细胞水平则显著升高，在一定程度上证实了肝癌患者机体的免疫水平有明显的降低，抗肿瘤能力显著下降。肝癌Ⅰ期、Ⅱ期患者与Ⅲ期患者各项指标的关系与上述相似，提示肝癌发展水平与机体免疫功能有显著相关性；另外，肝癌有可能直接或间接影响了T细胞的数量或者功能，T细胞免疫功能的不足可能加速肿瘤细胞增殖，而肿瘤细胞的过分增殖又可能抑制T细胞功能，致患者免疫耐受差，机体对病毒的清除能力降低，是引起疾病迁延的主要原因[10]。

自然杀伤细胞(NK)细胞与T细胞和B细胞不同，属于天然的具有直接消灭靶细胞功能的淋巴细胞，NK细胞具有较好的细胞毒性和肿瘤细胞杀伤能力, 可以攻击肿瘤, 并可以攻击被感染的细胞。研究指出，NK细胞在正常机体内发挥着抑制肿瘤增殖、调节免疫、抗炎等作用；对于原发性肝癌患者，T细胞受损后形成的CD4+、CD25+可明显抑制NK细胞消灭靶细胞的能力[11-12]。对于慢性肝硬化患者，外周血中NK细胞杀伤功能的降低可影响原发性肝细胞癌的发生，而这也可能介导早期癌细胞进行浸润性生长[13-14]。本研究中，原发性肝细胞癌患者外周血中NK细胞水平明显降低，说明NK细胞与肝癌细胞存在一定联系；肝癌的发生可能是因为NK细胞杀伤肿瘤细胞的机能严重受损[15]。

原发性肝细胞癌患者外周静脉血CD3+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞水平降低，可能与肿瘤的发生存在密切联系，对于如何通过调节免疫系统而抑制肿瘤增殖，尚需临床进一步研究。