米文强，任风芝，刘建芬，张向彬，王彩肖

(1.华北制药集团新药研究开发有限责任公司 微生物药物国家工程研究中心 河北省工业微生物代谢工程技术研究中心，河北 石家庄 050015；2.华北制药华坤河北生物技术有限公司，河北 石家庄 050000)

图1 那屈肝素钙的结构式

图2 N-NO加合物的结构式

欧洲药典(EP)提供了一个将N-NO基团转化为NO的化学过程，该方法使用氢溴酸在乙酸乙酯回流环境中使供试品脱去N-NO基团，产生的NO由氩气作为载气送入热能分析仪进行检测，进而计算供试品中N-NO基团的含量[1]。为保证检测方法有较高的灵敏度和较好的稳定性，该方法使用了-120 ℃及-160 ℃冷阱。EP规定那屈肝素钙中的N-NO基团限度为0.25 μg·mL-1。

参照EP方法，作者利用市售设备，采用乙酸乙酯回流液中的氢溴酸(用冰醋酸稀释至30%)将N-NO基团从反应物主链断下[5-7]生成NO；经氮气载运至检测器，与臭氧发生反应，生成具有荧光效应的NO2，进而被记录信号生成色谱图，进行那屈肝素钙中N-NO基团含量的测定，实验装置如图3所示。

图3 实验装置示意图

1 实验

1.1 试剂与仪器

那屈肝素钙，自制；N-亚硝基二丙胺(NDPA)对照品，Sigma；无水乙醇(色谱纯)；氨基磺酸(分析纯)；甲酰胺(优级纯)；氢溴酸(分析纯)；冰醋酸(分析纯)；乙酸乙酯(优级纯)；实验用水为超纯水，自制。

冷却循环泵；真空泵；臭氧发生器；800系列热能分析仪，英国Ellutia；超纯水机，美国Pall。

1.2 溶液的配制

反应液：称取氨基磺酸20 g置于烧杯中，加乙酸乙酯100 mL，搅拌至悬浊状态，放置3 d，经0.45 μm膜过滤，得到乙酸乙酯反应液；用冰醋酸将40%氢溴酸稀释至30%；……