米卫国，张 伟，刘建军，张昭鹏，杨 帆

陕西省汉中市中心医院胸外科,陕西汉中 723000

食管癌是全球常见的消化道恶性肿瘤，在世界范围内发病率居第7位，病死率居第6位[1]。晚期食管癌患者远处转移是其预后不良和高病死率的主要原因[2-3]。微小RNA(miRNA)是一种具有调节作用的非编码小RNA，通过靶向调节基因表达水平，在癌症的发生、发展和转移中起着重要的作用[4]。有研究报道，miR-133b的表达水平和食管癌的病理分级及预后密切相关[5-6]，与食管癌的恶性进展密切相关。转化生长因子-β受体1(TGF-βR1)是miR-133b的靶基因之一，是转化生长因子-β(TGF-β)/SMAD3信号通路的关键蛋白，TGF-β/SMAD3信号通路激活[7-8]在诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化(EMT)，促进肿瘤细胞侵袭和迁移中发挥重要作用[9]。但关于食管癌中miR-133b是否通过调控其靶基因TGF-βR1激活TGF-β/SMAD3信号通路，促进食管癌的侵袭和迁移的研究鲜见报道。因此，本研究拟明确miR-133b通过调控其靶基因TGF-βR1发挥对食管癌侵袭和迁移的作用及机制，为进一步探讨miR-133b作为治疗食管癌侵袭和迁移的作用靶点提供一定的实验基础。

1 材料与方法

1.1材料来源 人食管癌OE19、ECA109细胞，人正常食管上皮细胞(HEEC细胞)均购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)；胎牛血清、RPMI1640细胞培养基购自Hyclone公司；Opti-MEM细胞培养基购自Gibco公司；抗菌药物(青霉素、链霉素)、胰蛋白酶均购自中国Solarbio公司；兔抗TGF-βR1抗体、兔抗SMAD3抗体均购自Cell Signaling Technology公司；兔抗p-SMAD3、兔抗E-cadherin、兔抗N-cadherin、兔抗β肌动蛋白(β-actin)抗体均购自Bioworld Technology公司；RNA提取试剂盒、Trizol、蛋白提取裂解液均购自碧云天生物科技有限公司；miR-133b mimic、miR-133b negative control(miR-133b NC)、WT-TGF-βR1、MUT-TGF-βR1荧光素酶报告基因载体均购自上海吉玛公司；……