牛栋玲，赵亚娥，张宛钰，郭宏松，胡丽

西安交通大学基础医学院病原生物学与免疫学系，陕西 西安 710061

本课题组前期通过转录组测序、qRT-PCR检测和RNA干扰，确认了热休克蛋白家族(HSPs)中有17种基因参与粉尘螨温度应激响应，起关键应激调节作用的基因有6种，即HSF、HSC71、HSP70、HSP83-1、HSP83-2和HSP16-1，且各关键基因调节规律各不相同。HSP70、HSP83-1、HSP83-2和HSP16-1只参与热应激响应，而HSF和HSC71在热应激和冷应激响应中均发挥调节作用[8-10]。该研究第一次在mRNA水平确认了公认的生物应激响应基因HSPs参与粉尘螨抵抗温度胁迫的应激响应。然而，mRNA水平的改变并不能直接反映蛋白质水平的改变。目前虽然能够检索到螨类HSPs原核表达的相关文献[11-13]，但都是原核表达体系构建和重组蛋白诱导表达，缺乏蛋白水平的功能验证。

本研究选择粉尘螨HSP16-1为目的基因，尝试建立原核表达体系，探索重组蛋白表达的最佳诱导条件，通过绘制重组菌和空载菌在热胁迫和冷胁迫下的生长曲线，从蛋白水平验证HSP16-1在温度胁迫下的应激响应功能。这些研究结果将为深入探讨粉尘螨HSF、HSP70s和HSP90s等重要HSPs在温度应激响应中的作用机制及生物学功能奠定实验基础。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1螨虫培养与收集实验用粉尘螨来自本实验室人工气候培养箱纯培养，设置温度为(25 ± 1)℃，湿度为70%～75%。振筛分离法获取含螨粉尘[9]，采用自制取螨针在显微镜下分离粉尘螨雌性成虫。

1.1.2主要仪器与试剂智能人工气候培养箱和恒温水浴锅(东南仪器，中国)；视频显微镜(麦克奥迪，中国)；普通PCR仪(Thermo scientific，美国)；……