汪洋郑立秦长江

河南大学淮河医院普通外科，河南开封475000

壶腹部周围癌是指源于Vater 壶腹内的黏膜、十二指肠乳头附近黏膜、胰大导管黏膜及胆总管十二指肠壁间部黏膜上皮发生恶性病变的统称。壶腹部周围癌实施胰十二指肠根治切除的患者术后5 a生存率较低，大部分患者死于肿瘤局部复发和远处转移[1-3]，有些患者发现时已经失去手术时机。壶腹部周围癌具体发生、发展的机制仍不明确，没有明确的预后标志物。Toll 样受体4(TLR4)是一种模式识别受体[4]，可特异性地识别多种病原相关分子模式，偶联信号转导途径并激活细胞内信号通路，参与免疫应答、炎症调节、肿瘤发展等。TLR4 表达水平上调可能与部分恶性肿瘤的发生、发展有关，如胃癌、肠癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌[5-6]。在壶腹部周围癌中是否存在TLR4 的表达及其作用研究较少。本研究探讨了TLR4 在壶腹部周围癌的表达情况，有助于为壶腹部癌的综合治疗提供新的证据和研究方向。

1 资料与方法

1.1 一般资料

筛选本院普通外科2016 年1 月至2019 年6 月壶腹部肿瘤患者43 例。所有病例均行胰十二指肠根治性切除且临床资料完整，标本经病理组织学切片证实为壶腹部周围癌且所有病例术前均未接受化学治疗、放射治疗及免疫抑制治疗。通过查阅病案等方法收集性别、年龄、肿瘤大小、术前总胆红素水平、肿瘤分化程度、临床分期及淋巴结状态等临床病理参数。该研究得到河南大学淮河医院医学伦理委员会同意。

1.2 实验方法

采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测 43 例肿瘤组织及配对癌旁组织中TLR4mRNA 表达水平。采用免疫组化检测SP法染色，按照SP 试剂盒所附说明书进行操作。常规光镜观察TLR4 蛋白阳性表达，肿瘤细胞染色呈现棕黄色或棕褐色，表达部位以细胞膜为主，部分在细胞质。每张切片随机选取10 个高倍镜下(×400)阳性染色丰富的视野。

1.3 统计学方法

临床资料数据采用SPSS 22.0 软件进行分析，计量资料采用() 表示，两组以上计量资料的比较采用单因素方差分析，组间的两两比较采用t检验(LSD 法);计数资料及TLR4 表达水平与临床病理参数的关系采用χ2检验，各指标间表达强度的相关关系采用Spearman 等级相关分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 壶腹部周围癌患者肿瘤组织及癌旁组织TLR4 mRNA 表达水平

TLR4 mRNA 在壶腹部周围癌患者肿瘤组织及癌旁组织中均有表达，肿瘤组织中的TLR4 mRNA表达量高于癌旁组织，且二者差异具有统计学意义(P＜0.05)，见图1。

图1 壶腹部周围癌患者肿瘤组织及癌旁组织中TLR4 mRNA 表达水平比较（**P＜0.05）

2.2 壶腹部周围癌患者肿瘤组织中TLR4 蛋白表达及其与临床特征的相关性

43 例壶腹部周围癌患者中，TLR4 蛋白表达阳性患者25 例，阳性率58.1%。不同肿瘤的分化程度、淋巴结是否转移、临床病理分期的患者肿瘤组织中TLR4 蛋白的表达水平差异具有统计学意义(P＜0.05)。不同年龄、性别、术前总胆红素水平及不同肿瘤大小的患者肿瘤组织中TLR4 蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1 壶腹部周围癌患者肿瘤组织中TLR4 蛋白表达及临床病理特征情况

3 讨论

壶腹周围肿瘤是指发生在Vater 壶腹周围区域的肿瘤，其解剖部位特殊，很难对其定位及定性，甚至在手术前后也难以将其截然分开，临床表现主要为梗阻性黄疸、腹痛、消化道症状，过去三十年的发病率已有升高[7]。壶腹周围癌患者的生存变异度很大，有研究[8]显示，淋巴结阴性且组织病理分型为非胰胆管型的患者，5 a 生存率为88%，相反淋巴结阳性且组织病理分型为胰胆管型患者，5 a 生存率仅为20%。目前，针对壶腹周围癌患者的治疗仍以胰十二指肠切除术为主，辅助治疗肠型壶腹癌，胰胆管型壶腹癌并无显著改善[9-10]，尚不清楚能否以及如何应用该信息制定个体化治疗决策，尤其是辅助治疗。深入研究壶腹部癌的发病机制、寻找肿瘤诊断和预后的特异性分子标记物以及可用于治疗的基因靶点，有助于为壶腹部癌的综合治疗提供新的治疗和监控策略。

随着精准医学和免疫治疗的发展，越来越多的研究关注肿瘤与炎症、免疫的关系。Toll 蛋白样受体(TLR)是新发现的细胞表面的一种介导机体天然免疫受体蛋白，参与许多疾病的发病过程，与心血管疾病、肿瘤、自身免疫性疾病等都有着密切关系[11-12]。研究[13]证实，TLR 家族中最重要的成员是TLR4，TLR4 在多种肿瘤组织均有表达，而TLR4在壶腹部周围癌患者中的实际表达情况，目前鲜有报道。本研究通过RT-PCR 及免疫组化检测壶腹部周围癌病灶组织中TLR4 mRNA 水平及蛋白表达水平高于癌旁组织，提示TLR4 的高表达可能与其增殖有关。还有研究[14]表明，激活后的TLR4 能以不同方式促进肿瘤的增殖、抗凋亡、侵袭、转移能力，如TLR4 可抑制凋亡参与肿瘤免疫逃逸、活化肿瘤微环境中的内源性配体等。本研究通过分析临床病理特征与TLR4 的蛋白表达显示，患者在年龄、性别、术前总胆红素水平、肿瘤大小方面，TLR4 在组织中的表达无明显差异(P＞0.05)，但肿瘤分化程度、淋巴结转移情况、临床分期等方面TLR4 蛋白的表达有明显差异(P＜0.05)，提示TLR4 可能参与促进了壶腹部周围癌组织的恶性分化及远处转移过程。

综上所述，TLR4 在壶腹部周围癌组织中高表达，其蛋白表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和临床分期情况有关，提示TLR4 可能参与壶腹部周围癌的增殖、转移过程。目前，关于壶腹部周围癌研究的病例数量少，对于预后随访的研究观察数量不足，大样本的研究有待于进一步开展。