王 刚，连紫宛，李占强，张朝霞，樊 融，马 蕊

(1.青海卫生职业技术学院 医学基础教育研究中心，青海 西宁 810000；2.衢州市人民医院 病理科，浙江 衢州 324000；3.青海大学 高原医学研究中心，青海 西宁810000)

雪灵芝(ArenariakansuensisMaxim)是广泛分布于青藏高原的石竹科蚤缀属野生植物，藏药名谓“阿仲”。研究显示，其成分主要含有多糖、黄酮、三萜皂苷及生物碱，具有免疫调节、抗氧化及抗炎等生物学效应[1-3]。本课题组前期研究显示，雪灵芝粗多糖(Crude polysaccharide fromArenariakansuensisMaxim, AKCP)具有促进小鼠脾淋巴细胞增殖、NK细胞杀伤及巨噬细胞吞噬活性[4-5]；对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠的免疫功能发挥保护作用[6]；对S180荷瘤小鼠的瘤体生长，显现出抑制效应[7]。基于上述研究结果，本研究进一步探讨AKCP对S180荷瘤小鼠的免疫功能，是否具有激活作用。

1 材料与方法

1.1 试验材料及仪器

30日龄SPF级Balb/c小鼠，雌雄各半，购自西安交通大学医学部实验动物中心，动物许可证号：SCXK(陕)2018-001；S180及Yac-1细胞购于中科院上海细胞库；雪灵芝全草购自青海九康医药保健品有限公司，并参照文献[4-5]按以下方法提取AKCP：雪灵芝全草粉碎后，加入40倍体积水并以95℃浸提，提取液经乙醇沉淀后，采用Sevage法除蛋白，收集脱蛋白后的水相流水透析去除小分子杂质，以3倍体积乙醇沉淀后冷冻干燥，得到雪灵芝粗多糖(AKCP)粉剂。香菇多糖注射剂(LNT)购自南京易亨制药有限公司。ELISA试剂盒(IL-2、TNF-α、IFN-γ)以及荧光标记单抗(CD3-FITC、CD4-PE、CD8-PerCP)均购自达科为生物技术有限公司。xMark-10483酶标仪(Bio-red公司)，LightCycler 96PCR仪(Roche公司)，CytoFLEX流式细胞仪(BECKMAN公司)。

1.2 S180荷瘤小鼠模型建立

取0.2 mL体外培养的S180细胞(5×106cells/mL)注射于小鼠腹腔，1周后抽取腹水，离心沉淀细胞后，以生理盐水洗涤并调整细胞浓度至1×106cells/mL，按每只0.2 mL接种于Balb/c小鼠右前肢腋窝皮下。……