谢丽基，谢芝勋，王盛，黄娇玲，邓显文，谢志勤，罗思思，曾婷婷，张艳芳，张民秀，范晴

(广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室，广西 南宁 530001)

禽呼肠孤病毒(ARV)主要引起家禽的病毒性关节炎/腱鞘炎、矮小综合征及吸收不良综合征等，尤为严重的是诱发免疫抑制，造成家禽对疫苗免疫应答能力和各种病原体抵抗力降低。σA蛋白是禽呼肠孤病毒S2基因编码的结构蛋白，能激活PI3K-AKT信号通路的作用[1]，与禽呼肠孤病毒抗干扰素作用有关[2]，在ARV的感染致病过程中发挥重要作用。本课题组在前期的免疫共沉淀(CO-IP)、质谱鉴定以及酵母双杂交筛选的研究中发现，禽源NME2是潜在的与禽呼肠孤病毒 σA 蛋白互作的宿主蛋白[3]。

NME(non-metastasis cells)基因即NM23基因，是Steeg等[4]学者从7株转移能力不同的小鼠黑色素瘤细胞系中，用差示杂交的方法蹄选鉴定出的一种与肿瘤转移抑制相关的基因，他们将此基因命名为NME基因。迄今为止，已发现属于基因家族的有10种，它们分别是到NME1到NME10[5]。二磷酸核苷激酶(nucleoside diphosphate kinase，NDPK)活性是NME家族共同的特征[6]，其中，NME2(NME/NM23核苷二磷酸激酶2)编码的NDPK的B亚基，具有核苷二磷酸激酶活性，催化二磷酸核苷转化为相对应的三磷酸核苷[7]，参与细胞的的能量代谢[8]、微管解聚[9]等过程，影响肿瘤的浸润和转移。

因此，本研究构建禽源NME2基因的真核表达重组质粒pEF1α-Myc-NME2，为后续进一步验证宿主蛋白NME2是否与禽呼肠孤病毒σA相互作用，并研究其对σA基因功能的影响奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要试验试剂

RT-PCR试剂盒、pMDTM18-T Vector Cloning Kit、PrimeScript Ⅱ 1stStrand cDNA Synthesis Kit、pEF1α-Myc载体和限制性内切酶SalⅠ和NotⅠ购自宝日医生物技术(北京)公司；……