闫慧清，敖选真，刘 露，周 琴，孙贵连，黄 绒

小立碗藓基因敲除载体的构建及功能研究

闫慧清，敖选真，刘 露，周 琴，孙贵连，黄 绒

(贵州师范大学生命科学学院，贵阳 550025)

(Lateral organ boundaries domain)是植物中特有的基因家族。前期研究发现灰霉菌处理小立碗藓导致配子体中的上调表达，但的功能尚不明确。因此提取小立碗藓DNA，PCR扩增基因的上下游片段，依次插入PTN182载体，利用同源重组原理构建敲除表达载体，酶切和测序验证插入序列的正确性。通过工作浓度为20%的PGE 6000介导小立碗藓原生质体转化，筛选鉴定得到敲除后的突变体植株，观察到敲除后小立碗藓不形成茎叶体结构且配子体成丝状。结果为深入探究在小立碗藓的形态建成调控病原菌侵染的抗性作用奠定基础。

基因；载体构建；小立碗藓；配子体

基因家族是一类在植物中特有的基因家族，参与高等植物侧生器官的发育，对侧生器官边界的建成有一定作用，影响地上、地下器官的形成与发育，其家族的普遍功能可能是参与侧生器官近远轴极性的建立[1]。研究发现该基因家族还能参与植物体内激素积累和植物花青素等，与植物非生物胁迫以及病原菌抗性相关[2-3]。Shuai等利用从拟南芥（）中发现一个植物特有的在侧生器官近轴端基部中表达的新基因，在拟南芥基因数据库找到的基因家族共有42个[4]。其编码的蛋白质产物中都包含着一段约有100个氨基酸残基且与基因相同的LOB保守结构域。

LBD蛋白由氨基端的LOB结构域和羧基端的可变C末端组成[5]。……