赵 琪, 何长海, 王 志, 王雪峰, 刘晓飞

（河南省南阳市第一人民医院泌尿外科，河南 南阳 473010）

DNA 甲基化修饰与肿瘤的发生与进展密切相关［1］。 烷 基 化 修 复 同 源 体3 （alkylation repair homolog 3，ALKBH3） 能以细胞特异性方式去甲基 化 并 修 复DNA 甲 基 化 损 伤［2-3］。DANGO 等［4］发现：ALKBH3 可通过激活信号辅整合素1 复合体亚 基3 （activating signal cointegrator 1 complex subunit 3，ASCC3）解开DNA 双链来识别烷基化损伤单链DNA 并修复受损的DNA；而ALKBH3失活可抑制肿瘤细胞增殖。已有研究［5-8］表明：ALKBH3 在头颈癌、乳腺癌、前列腺癌和尿路上皮癌等多种肿瘤组织中特异性高表达，且其上调表达能促进肿瘤细胞生长、迁移和侵袭，而ALKBH3在膀胱癌中的作用和机制尚不清楚。因此，本研究探讨ALKBH3 在膀胱癌中的表达及其对膀胱癌细胞生长、转移和血管新生的影响，旨在为膀胱癌的治疗提供新的靶点。

1 材料与方法

1.1 实验动物、细胞、主要试剂和仪器12 只6 周龄SPF 级雄性BALB/c 裸鼠购自河南省实验动物中心，动物生产许可证号：SCXK（豫）2017-0001。人正常膀胱细胞系（SV-HRUC-1）和人膀胱癌细胞系（BIU87 和T24）购自美国典型培养物保藏中心， 人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC） 和内皮细胞培养基购自武汉普诺赛生命科技有限公司。胎牛血清和RPMI-1640 培养基购自美国Gibco 公司，小鼠抗人血管内皮生长因子A （vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A）、ALKBH3、CD31和GAPDH抗体购自美国Santa Cruz Biotech 公司，RIPA 裂解液、ECL 发光液、CCK-8 试剂盒和HRP 缀合的抗小鼠IgG 二抗购自武汉纯度生物科技有限公司，携带sh-ALKBH3 和阴性对照（sh-Con）的慢病毒载体购自上海汉恒生物科技有限公司。BX5 型倒置荧光显微镜（日本Olympus 公司），Elx800 型酶标仪（美国Bio-Tek 公司）。

1.2 患者组织样本收集收集2016 年10 月－2017 年10 月河南省南阳市第一人民医院泌尿外科行经尿道切除术或根治性切除术的16 例膀胱上皮细胞癌患者（经病理学确诊）的癌组织和癌旁组织样本，采用蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测ALKBH3 表达水平。……