张凤国,张永勤,邢明霞,许文廷,吕兴霜,王裕晓,王鹏博

(青岛科技大学 化工学院，山东青岛266042)

Lowrry法[1]作为一种蛋白浓度的测定方法，广泛应用于食品、医药、医疗诊断、酶制剂、生物化工等行业的蛋白浓度测定。相较于BCA法[2-3]、考马斯亮蓝(Bardford)G250法[4-5]、荧光光谱法[6]、紫外法[7]等蛋白浓度测定方法，Lowrry法的灵敏度最高[8]，因而测定不易受杂质干扰而广为采纳。迄今为止，有多项国家标准[9-10]将该方法应用于蛋白酶活力测定中的蛋白浓度测定;Sigma公司也出售相关试剂并提供相应的蛋白浓度测定方法[11]。

该法的测定原理是基于蛋白质分子中所存在的酪氨酸和色氨酸，它们与碱性硫酸铜作用形成铜-肽键络合物，后者与酪氨酸共同作用使酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸还原生成钼蓝和钨蓝，其颜色与酪氨酸含量成正比。

然而，目前文献所报道测定条件有多种，主要集中在两方面。其一，所用的Folin A试剂不同，有的使用Folin A(以下简称为Folin A法)[12]，而有的是Na2CO3(以下简称Na2CO3法)[9-11];其二，文献报道的检测波长有多种[13-25]。但有关测定波长方面的研究至今未见相关报道。NOLASCO-SORIA等[26]较全面地综述了蛋白酶活力测定方法中的Lowrry法，但并未评述其最适检测波长，也未比较Folin A试剂及其替代试剂Na2CO3间是否有差异，这为选择适宜的测定条件带来了混乱。因此，本工作拟对此进行必要的研究，以便正确地确定Lowrry法测定蛋白浓度的条件。

1 实验部分

1．1 材料与仪器

酪氨酸、酪蛋白，上海阿拉丁生化科技股份有限公司;牛血清白蛋白，美国Sigma公司;磷酸、钼酸钠、钨酸钠、溴水、硫酸锂、碳酸钠、硫酸铜、酒石酸钾钠、氢氧化钠、磷酸钠、磷酸二氢钠，国药集团化学试剂有限公司。……