陈丽莎，徐永成，曾书君，陈惠新

(中山大学附属惠州市中心人民医院 消化内科，广东 惠州 516000)

近年来涌现了大量的关于表观遗传修饰、DNA损伤反应、肿瘤发生发展三者之间关系的研究，其中包括是否可通过调节组蛋白甲基化修饰状态改变肿瘤细胞对DNA损伤的反应，从而降低肿瘤的耐药性。磷酸化H2AX(serine 139，γH2AX)是反映DNA损伤的重要指标，为细胞发生最严重的DNA损伤—DNA双链断裂(DNA double- strand break, DSB)的标志[1]。对结肠癌的研究[2]显示，含Jumonji结构域的蛋白2B(Jumonji domain- containing protein 2B, JMJD2B)可通过STAT3信号通路调节DNA损伤反应，但JMJD2B在胃癌中是否也可通过调节DNA损伤反应影响肿瘤的发生发展，尚无相关研究。

1 材料与方法

1.1 材料

人胃癌细胞株MGC803、SGC7901来自惠州市中心人民医院消化实验室。胎牛血清及RPMI- 1640培养基购自美国Gibco公司。JMJD2B siRNA、阴性对照siRNA(与任何靶基因无序列同源性)购自上海吉玛公司。一抗：兔抗JMJD2B单克隆抗体(美国Bethyl Laboratories公司)、兔抗phorsphor- H2AX(Ser 139)多克隆抗体(美国Millipore公司)、兔抗α- tubulin抗体(内参照，美国Cell Signaling Technology公司)；二抗：山羊抗兔 HRP(上海康成公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 对MGC803、SGC7901细胞使用含10%胎牛血清的RPMI- 1640培养基培养，并置于恒温37 ℃、体积分数5% CO2的培养箱，95%湿度条件下进行培养。

1.2.2 siRNA转染 取对数生长期细胞种植于6孔板中，按细胞2×105孔-1进行接种，24 h后待细胞生长至密度约50%时，将JMJD2B siRNA或阴性对照siRNA使用转染试剂Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司)转染，48 h后收集细胞或进行后续实验。

1.2.3 彗星实验 采用0.25%胰蛋白酶消化对数生长期细胞，以1 000 r·min-1离心10 min，PBS调整细胞浓度为5×104ml-1。使用彗星实验试剂盒(Comet assay,北京博乐通生物科技有限公司)，取100 μl 0.5%正常熔点琼脂糖铺于磨砂载玻片上，盖上盖玻片，置于冰上固化5～10 min；……