赵 霞，李 培，汤丽莹，茹 静，王 晶

（首都医科大学附属北京朝阳医院综合科，北京 100043）

糖尿病性视网膜病是高血糖引起的微血管并发症［1，2］。由于mtDNA与产生ROS的位置非常接近，并且mtDNA中没有像核DNA一样有效的DNA修复系统，因此mtDNA非常容易受到ROS的攻击［3］。DM中存在的高血糖环境会导致ROS产生增加，DNA损伤以及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）水平降低［4-6］。烟酰胺单核苷酸腺苷酸转移酶1（NMNAT1）是所有生物中的核酶，在再循环途径中对NAD合成至关重要，调节NAD依赖性酶的功能［7-9］。作为Bcl-2家族成员，抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL与促凋亡因子Bax调节线粒体途径的平衡，该平衡决定糖尿病刺激后视网膜细胞的存活［10］。

1 资料与方法

1.1 材料

1.1.1 大鼠视网膜细胞分离筛选30只雄性Wistar大鼠（C57BL / 6J），使用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型，干预时程为4个月。

1.1.2 实验分组大鼠随机分为3组：对照组（正常饲养同龄的大鼠，n=10），观察组（使用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型，n=10），治疗组（胃部进行牛磺酸注射治疗，n=10）。通过颈脱位法处死大鼠、分离眼球、收集视网膜，用D-Hank溶液洗涤，切成1×1 mm小块，0.25%胰蛋白酶溶液中37°C孵育30min，30μm尼龙筛过滤，1000 rpm离心5min沉淀，接种Dulbecco改良Eagle培养基和20%胎牛血清的培养瓶，37°C培养。

1.2 方法

1.2.1 组织学在含有0.1%Triton X-100的PBS中将视网膜切片（厚度为8～10μm）透化5min，0.1%Tween 20和0.1%叠氮化钠在室温下放置2h。一抗室温孵育2h。在4℃温育12h期间，用花生凝集素凝集素对视锥细胞感光体的内部/外部片段进行染色，添加染料二酰胺二苯基吲哚（DAPI），冲洗、固定，使用数字病理系统扫描的整个垂直切片对PNA，Brn-3a和GFAP标记的切片进行计数。

1.2.2 蛋白质印迹分析测定蛋白质浓度，等量的蛋白质溶解在SDS-聚丙烯酰胺凝胶，电泳转移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。……