张炎达 施少华 潘慧青 杨荣平 赵 齐

(1.福建贝迪药业有限公司市级企业技术中心 福建宁德 355300；2.福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福州 350013)

H9N2 亚型禽流感病毒（AIV）起源于野鸟与水禽，自1966 年首次分离后便开启全球化的蔓延与暴发[1]，禽流感属禽类接触性传染病，随着现代养禽集约化与规模化的推进，H9N2 亚型AIV 已成制约养禽业健康可持续发展的重要因素之一。 目前，H9N2亚型AIV 在国内家禽中分布广泛，且在新型禽流感的演化中角色重要[2]，而当前疫苗接种是公认的控制AI 流行的最有效方法。

随着国内养殖业“减抗”、“无抗”模式的推行，中草药及其提取物已引起行业专家和学者的足够重视。于潼等[3]研究发现黄芪多糖与灭活H9N2 亚型禽流感病毒混合时具有协同作用， 可提高小鼠外周血B 淋巴细胞和CD3+、CD4+T 淋巴细胞亚群比例，并对小鼠外周血T 淋巴细胞亚群有调节作用； 黄劲等[4]研究发现野菊花、穿心莲、柴胡等10 味中药提取的中药制剂对H9N2 亚型AIV 攻毒鸡具有有效抵抗效力，减少发病率和死率；同时，我们前期研究发现太子参制剂对禽1 型副黏病毒灭活疫苗免疫具有增强作用； 然而， 经文献检索仍未发现太子参须在H9N2 亚型AIV 方面的研究报道， 为此本试验尝试性探究太子参须提取物对鸭H9N2 流感病毒体外生长的影响作用， 以期为未来探究太子参须提取物在控制AI 上的应用提供一定的数据基础。

1 材料和方法

1.1 材料 太子参须提取物干粉由福建贝迪药业有限公司采用水提提取制备并提供； 黄芪多糖干粉购自北京生泰尔科技股份有限公司， 以葡萄糖为标准品， 通过苯酚-浓硫酸法测得太子参须提取物干粉低剂量、高剂量和黄芪多糖含量分别为25%、75%和50%；H9N2 亚型AIV 和MDCK 细胞 （犬肾传代细胞）均保存于福建省农业科学院畜牧兽医研究所。

1.2 试验方法 H9N2 亚型AIV 的扩增与MDCK细胞的培养均参考文献[5]；H9N2 亚型禽流感病毒毒力检测方法采用TCID50试验法[5]；试验分为太子参须提取物高剂量组（75%）、低剂量组（25%）、黄芪多糖阳性对照组和空白对照组， 不同组别条件下使得103TCID50H9N2 亚型AIV 感染MDCK 细胞， 具体用药剂量如下： A、 太子参须提取物低剂量组每孔0.25 g/3 mL；B、 太子参须提取物高剂量组每孔0.25 g/3 mL；C、黄芪多糖组每孔0.1 g/3 mL；D、空白对照组采用生理盐水。 每组3 个复孔，48 h 后测定感染孔TCID50值，结果用平均值±标准差值（M±S）表示， 数据均采用SPSS 统计处理软件进行单因素方差分析。 上述试验均在福建省农业科学院畜牧兽医研究所实验室完成。

2 试验结果

由表1 可知，与空白对照组比较，太子参须提取物对鸭H9N2 亚型流感病毒在MDCK 细胞上的体外增殖具有一定抑制作用， 且太子参须提取物高剂量组（75%）的抑制作用最优，统计学差异极显著（P＜0.01），体外抑制效果高低再依次为太子参须提取物低剂量组（25%）和黄芪多糖组；同时，对比太子参须提取物高低剂量组的H9N2 亚型禽流感病毒log10TCID50值可知， 太子参须提取物对鸭H9N2 亚型流感病毒体外生长的抑制作用呈一定的剂量关系，具体剂量关系仍需后续试验验证。

表1 不同药物对鸭H9N2 亚型病毒体外生长的抑制作用

3 结论与讨论

本试验观察发现， 太子参须提取物对鸭H9N2亚型流感病毒在MDCK 细胞上的体外增殖具有一定抑制作用， 且呈相应的剂量关系。 试验中采用TCID50试验法，TCID50可检测病毒毒力大小，比较空白对照组和三种药物处理组的TCID50值可直观判断鸭H9N2 亚型流感病毒在MDCK 细胞上的体外增殖情况和药物抑制效果， 但基于试验操作限制仍不能推测太子参须提取物是进入细胞内抑制病毒复制增殖还是灭活游离病毒粒子等。另外，本文所涉及的太子参须提取物仅以水提取物干粉作为试验材料， 对于是太子参须提取物内哪一种或多种组分起到关键作用仍不清楚， 未来还需在病毒增殖抑制机理和精确组分等方面进行深入研究， 以期为未来探究太子参须有效组分在控制AI 上的应用和疫苗佐剂的开发提供一定的数据基础。