姚学良,蔡琰,徐晓丽,钟文慧,包海岩

美人鱼发光杆菌杀鱼亚种LAMP快速检测方法的建立与应用

姚学良,蔡琰,徐晓丽,钟文慧,包海岩*

天津市水产研究所, 天津 300221

建立了美人鱼发光杆菌杀鱼亚种的环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP)。针对基因保守序列的6个区域设计2对特异引物，利用链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在恒温65 ℃下保温40 min。采用钙黄绿素作为显色剂，FTA卡采集病样肝组织中病原菌核酸。结果显示：以基因建立的LAMP方法能够特异性检测美人鱼发光杆菌杀鱼亚种，检测灵敏度为2.6×102cfu/mL。针对美人鱼发光杆菌杀鱼亚种基因建立的LAMP检测方法具有较好的特异性和稳定性，可用于美人鱼发光杆菌杀鱼亚种的野外现场快速检测。

豹纹鳃棘鲈; 美人鱼发光杆菌杀鱼亚种;; LAMP

豹纹鳃棘鲈(Lacépède)俗称东星斑、豹鲙、花斑刺鳃鮨，隶属鲈形目、鮨科、鳃棘鲈属。主要分布于西太平洋至印度洋海区，东至斐济，西到非洲东岸，红海等地，南到澳洲，北自日本南部。该鱼属高档食用鱼类，在国际市场上深受欢迎，市场前景广阔，同时具有较高的观赏价值。目前对豹纹鳃棘鲈的分子分类、仔鱼的行为、生态学、胚胎发育[1-4]、基础代谢[5]，病害防治[6]等进行了详细而深入的研究。然而，随着养殖规模化集约化发展，豹纹鳃棘鲈病害凸显，有关豹纹鳃棘鲈疾病诊断与防治的研究鲜有报道，生产上亟需简便、快速的现场检测病害的方法。

Loop-mediated isothermal amplification，LAMP是2000年由Notomi等[7]发明的一种新型的体外等温扩增特异核酸片断的技术。LAMP是利用靶序列上6个关联……