张维峰，刘斯贞，隋金伦

（沂南县畜牧发展促进中心 276300）

1 诊断方法

1.1 RT-PCR诊断检测方法

当前，动物疫病诊断中生物学检测方式是比较常用的方法，由于能检测到不同致病源特异性基因片段，因而结合BVDV保守序列设计通用性或者结合不同基因差异序列设计分型的检测引物，以此鉴定并分型研究BVDV病毒。相关学者结合GenBank中宣布的BVDV高度保守UTR序列有效设计鉴定与分型引物，构建BVDV鉴定RT-PCR诊断方法与分型诊断方法，鉴定引物能够对BVDV-1与BVDV-2型分别延伸出288bp的特异性片段，而分型异物可分别将BVDV-1与BVDV-2衍生出316bp与110bp两种特异性片段，其在BVDV流行病学调查与临床病料检测中有一定的适用性，因而应用前景广阔。

1.2 荧光定量诊断检测方法

该诊断方法是基于常规PCR方法中融合光谱技术发展而成的核酸定量检测方法，其具有很强的敏感性。相关学者构建的BVDVSYBRGreen荧光定量诊断方法，其敏感性与特异性好，其中敏感性达到最低检测下限10拷贝，与牛副流感病毒3型及牛传染性鼻气管炎病毒不会发生交叉反应，但其不能鉴别诊断猪瘟病毒。而基于BVDV-1与BVDV-2构建的双重TaqMan荧光定量PCR鉴别诊断方法，是结合牛病毒性腹泻病毒UTR而设计的一种引物鉴别诊断方法，其与猪瘟、牛传染性鼻气管炎及口蹄疫等病毒不存在交叉反应。对于BVDV-1与BVDV-2该诊断方法最低检测下限分别是10拷贝/μL与100拷贝/μL，因而在BVDV临床诊断与分型诊断检测中比较适用。

1.3 LAMP诊断方法

其属于一种环介导等温技术，属于新型核酸等温扩增技术，操作方便且现场应用灵活等特点，能够快速诊断临床疾病。……