段笑笑 邴啟政 张严琦 王 媛 刘 倩 马 帅 李 彦

（青岛市动物疫病预防控制中心， 山东青岛 266000）

副猪嗜血杆菌（Haemophihlsparasuis, HPS）为巴氏杆菌属短小杆菌，革兰氏染色阴性，存在于健康猪上呼吸道，特别是鼻黏膜和扁桃体区域[1]。菌株移行到肺部则引起肺炎，从而引发全身性疾病，特征性临床症状为纤维素性浆膜炎、关节炎、脑膜炎等，被称为Glasser's 病[2]。副猪嗜血杆菌病在断奶前后和保育期仔猪中多发，尤其与蓝耳病、圆环病毒2 型混合感染时，发病率与死亡率都较高，是给我国养猪业中造成严重的经济损失的猪疫病之一。

副猪嗜血杆菌分离较困难，死亡病例中较难分离，一般采用具有典型临床症状、濒临死亡、未用抗生素治疗的病猪，无菌采集其关节液、心包液、胸腔积液等，并将这些液体平板划线于TSA 培养基上，37℃，5%CO2培养24～48 h，连续纯化培养，挑取针尖大小，透明光滑的菌落进行镜检、生化鉴定、PCR 和测序等对致病菌进行鉴定，最终确定分离菌株是否为HPS。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 病料及菌种来源

试验病料来源于青岛某养猪场一份疑似HPS 感染的病猪关节液。

1.1.2 药品与试剂盒

TSA、TSB 培养基购自北京银杏林科技开发有限公司；胎牛血清购自浙江天杭生物科技有限公司；NAD、细菌生化鉴定管、药敏纸片购自青岛海博生物技术有限公司；dNTP、PCR Buffer（Mg2+）、Taq DNA 聚合酶、DL-2000 均购自TaKaRa 生物公司。

1.1.3 主要培养基

TSA 培养基的配制：称取TSA 培养基40 g ，溶解于1 000 mL 蒸馏水中，121℃灭菌20 min，冷却至60℃左右，加入含0.005%的NAD 和5%胎牛血清，倾倒平皿至凝固，4℃保存备用。

TSB 培养基的配制：称取TSB 培养基30 g，溶解于1 000 mL 蒸馏水中，121℃灭菌20 min，冷却至60℃左右，加入0.005%的NAD 和5%胎牛血清，4℃保存备用。……