黄宣运，杨光昕，史永富，黄冬梅，叶洪丽，蔡友琼

（1.中国水产科学研究院东海水产研究所，上海 200090；2.农业农村部水产品质量安全风险评估实验室（上海），上海 200090；3.上海海洋大学，农业农村部鱼类营养与环境生态研究中心，上海 201306；4.上海海洋大学，水产科学国家级实验教学示范中心，上海 201306）

亚甲基蓝（methylene blue，MB）是一种吩噻嗪类化合物［1］，最早被用于工业染色和治疗细菌性疟疾。近年来，亚甲基蓝被用于替代禁用药物孔雀石绿［2］防治水产动物养殖过程中的水霉病［3］。与孔雀石绿相比，亚甲基蓝毒性较低，但依然存在副作用［4-5］。目前，欧盟规定禁止亚甲基蓝用于动物食品生产过程，日本规定动物食品中亚甲基蓝最高残留限量为10μg·kg-1［6］。因此，建立一种简单、快捷的检测亚甲基蓝的方法显得十分必要。

现有检测动物源性食品中亚甲基蓝残留的方法主要有仪器法和免疫学分析法，仪器法主要包括紫外分光光度法［7-8］、液相色谱法［9］、液相色谱串联质谱法［10］等。与仪器法相比，免疫学分析法具有灵敏、快速、简单等优点，更适合用于水产品药物残留的初步筛查［11-13］。目前，基于免疫学原理开发的快速检测方法主要针对氟喹诺酮类［14-15］、孔雀石绿［16］等指标，对于亚甲基蓝尚未有相关研究报道。

本研究以亚甲基蓝代谢物天青C（azure C）作为亚甲基蓝的半抗原，采用戊二醛法合成亚甲基蓝人工抗原，并制备和鉴定了亚甲基蓝鼠源多克隆抗体，以期为下一步制备亚甲基蓝单克隆抗体及开发快速检测试剂盒提供参考。……