操良会

（重庆市长寿区中医院 检验科，重庆 401220）

0 引言

沙眼衣原体（CT）感染为常见的性传播疾病。我国的CT感染率较高，特别是高危人群的感染率达5%-17%[1]。目前，CT检测采用直接镜检、细胞培养、直接荧光抗体染色等方法[2]，其中细胞培养是“金标准”。连接酶链反应（LCR）是类似于PCR，通过耐热DNA连接酶将2对引物连接到靶核苷酸序列上，并在体外进行变性、复性完成核酸扩增[3]。本文探讨LCR在CT检测中的应用，为临床提供快速高效的实验诊断。

1 资料与方法

1.1 一般资料。实验组：2017年1至10月我院收治的160例CT感染者，男77例，女83例，年龄15～73岁；对照组：同期进行体检的30例健康人，男21例，女9例，年龄1～72岁。纳入标准：至少一种泌尿生殖道感染症状（如：分泌物增多、排尿困难、外阴红肿瘙痒）；有非婚性接触史，或2周内有过与上述症状者性交，且未接受过抗生素治疗。排除标准：无非婚性行为，生殖道不适，外阴红肿。

1.2 细胞培养。Hella229细胞（中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库）与含10%FBS（SH30396.03，HyClone）的1640（SH30809.01，HyClone）培养液混合调整密度为1×105/mL，取0.5 mL混合液加入24孔板中放入37℃，5%CO2培养箱中培养48 h，吸出培养液，向培养液中加入0.2 mL待检者生殖器拭取物标本，3000 rpm离心1 h，取上清液后加入混合试剂（放线菌酮1μg/mL、庆大霉素10μg/mL、万古霉素10μg/mL、两性霉素B2.5μg/mL及衣原体培养液1 mL），将样本与标准阳性标本进行比较。

1.3 连接酶链反应（LCR）。采集晨尿或长时间不排尿后的首次尿20-30 mL。检测前混合尿液，取1 mL加入到微型离心管中离心（13000 rpm，10 min），弃上清液，加入1 mL裂解液（碧云天生物技术有限公司）。取100μL裂解物置入扩增管，按CT试剂盒配置反应体系（美国Abbot公司），放入LCR扩增仪（Abbott LCx Thermal Cycler）进行扩增。扩增条件：变性96℃，35 s；退火54℃，30 s；延伸60℃，35 s，40次循环。

1.4 观察指标及评价标准。灵敏度=真阳性数/（真阳性数＋假阴性数）、特异度=真阴性数/（真阴性数＋假阳性数）、阳性预测值=真阳性数/（真阳性数＋假阳性数）、阴性预测值=真阴性数/（真阴性数＋假阴性数）。

1.5 统计学分析。使用SPSS 21.0统计软件进行分析。计数资料以率（n，%）表示，进行χ2检验，P＞0.05差异无统计学意义、P＜0.05差异有统计学意义。kappa检验进行一致性分析，kappa＞0.7有高度一致性。

2 结果

2.1 LCR检测对CT感染的诊断价值。160例CT感染者的尿标本分别进行LCR和细胞培养，LCR检出85例，细胞培养确诊70例（表1，图1），两种方法检出率有统计学意义（P＜0.01），且LCR和细胞培养的检出率分别为53.1%和77.7%。LCR检测的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为100.00%、83.33%、82.37%、100.00%。

表1 LCR与细胞培养的检测结果

2.2 LCR与细胞培养的一致性分析。LCR诊断CT的ROC曲线下面积为0.912（95%CI:0.862-0.961，图1），Kappa值为0.814，表明LCR法检测CT的诊断价值较高，与细胞培养的结果有较高一致性（P＜0.0001）。

图1 LCR诊断CT的ROC曲线

2.3 健康人群LCR和细胞培养的CT检出率比较。30例健康人群的尿标本分别进行LCR检测和细胞培养（表2，图2），LCR检出3例，细胞培养未检出。两种方法的阳性率无统计学意义（P=0.236）。

表2 健康人群LCR与细胞培养的检测

3 讨论

图2 健康人群CT的检出率

CT为泌尿生殖道感染的重要病原体之一，受感染者数量呈持续增长。细胞培养作为临床诊断CT最直接的依据，表现出较多缺点：①耗时长，操作繁琐，技术要求高，成本高，不利于临床大量标本的检测；②检测的是活体CT，标本采集、运送、接种等过程可能存在病原体丢失、活力减弱或失活，造成敏感性降低；③标本采集有侵入性，可能存在二次感染。

鉴于此，我们引入LCR技术，其敏感性和特异性均优于聚合酶链反应[5]，诊断CT的价值较大[6-8]。本次数据表明，160例CT感染者进行LCR检测，阳性率达53.1%，漏检率为0（敏感度100%），弥补了细胞培养敏感性低的缺点。当患者进行LCR检测CT为阴性时，基本可以排除CT感染（阴性预测值为100%），而CT为阳性时，应结合患者的临床症状及病史判断患者是否存在CT感染（阳性预测为82.37%）。数据还表明LCR诊断CT的准确率及临床价值较高，可使用LCR对CT初筛。而30例健康人群LCR检测3例CT阳性，分析产生的误差可能是实验过程中受污染，需优化LCR实验流程[9-12]。

综上所述，LCR检测在一定程度上可替代CT的培养，对CT感染的诊断具有指导作用，可为CT感染的治疗提供参考依据。