谭凯丽，赵 晗

（1.煤与煤层气共采国家重点实验室，山西 晋城 048000；2.易安蓝焰煤与煤层气共采技术有限责任公司，山西 晋城 048000）

近年来，煤炭生物转化技术逐渐受到重视，国内外诸多学者陆续开展了煤炭生物成气的相关研究[1-3]，并在实验室条件下以煤为底物，通过接种高效产甲烷混合菌群进行模拟成气实验，获得良好的产甲烷效果[4-5]。在实验室环境下进行煤炭生物气化实验时，菌群结构稳定、产甲烷效果良好的混合菌对煤炭生物气化实验起着关键作用[6]。目前，微生物菌种的保藏多为单菌种的保藏，关于混合菌群的保藏鲜见报道。而根据经典厌氧发酵理论[7-8]，参与到产甲烷气过程中的微生物主要为水解发酵型细菌、产氢产酸菌及产甲烷菌，这些混合菌共同作用于煤基质而产生生物煤层气。曾有学者对山西寺河矿区121 煤层气井产出水样中的菌群进行保藏实验，得出菌群保藏的最佳条件为25 ℃下的煤基-基础盐配方，此方法保藏的产甲烷菌群能长期维持在较高的活性状态，保持较好的产甲烷能力[9]。

微生物菌种保藏方法很多，冷冻干燥保存法和冷冻保存法是目前公认的长期保存微生物菌种的最安全、可靠的方法。其中冷冻保存法中的液氮超低温保存法适用范围广，可用于大多数微生物，特别是不适合用冷冻干燥保存法保存的微生物，因此该方法已经成为长期保存微生物菌种的最佳方法[10]。许多研究表明[11]，在低温保藏细胞和组织时，添加保护剂比不添加保护剂的保藏效果更好。……