尹建

摘 要：法医毒物学是法医科学的重要组成部分，在解决各类中毒事件中发挥着重要作用。在毒物鉴定中，各种体液和组织被用于筛查，包括尿液、血液、唾液、汗液、头发和指甲，它们各有优缺点。尿液被认为是筛查方法的黄金准则，因其取样简单且无创。此外，蛋白质和脂类会干扰分析物信号，从而降低灵敏度，而尿液中的蛋白质和脂类含量相对较低。与尿液相比，血液取样的优势在于它很难伪造，而且便于对浓度进行毒理学解释，使其成为验证性分析的金标准。唾液采集方便，无侵入性，并且便于监督，但大部分唾液分析只能检测到原体，代谢物的含量低。此外，采用口服或吸烟方式摄入的物质（如乙醇、大麻等）分析浓度较高，不能作为法庭证据，因此唾液分析一般作为血液和尿液分析的辅助手段。

关键词：法医毒物;司法鉴定;检测技术

分类号：D919

前言

目前，干生物基质点微样技术成为法医毒物学的应用研究热点，尽管DMS 具有很多优点，但它也带来了一些挑战，由于样本基质复杂，分析过程中容易受到内源性物质的干扰，要求分析方法具有专属性;样品量少且分析物浓度低，需要高灵敏的检测技术才能获得足够的灵敏度;分析目标物数量大，范围广，要求分析方法具有高通量、筛选的优点。

一、微样技术检测方法

液相色谱-二极管阵列检测器（LC-DAD）。二极管阵列检测器（DAD）克服了普通紫外可见吸收检测器的缺点，它不仅能获得色谱分离组分的三维光谱色谱图，為分析工作者提供丰富的定性定量信息，而且具有更好的波长分辨率和更高的灵敏度。

气相色谱-质谱联用（GC-MS）。气相色谱（GC）与质谱（MS）联用结合了色谱的分离效能和质谱的结构确证功能，是DMS 分析的主要方法之一。GC 的运行时间通常较长，这与样品制备的时间和分析目标物衍生化的必要性有关。GC-MS 已经应用于分析DBS 中杀虫剂、滥用物质、抗癫痫和抗抑郁药物等。由于GC-MS 仍是系统毒物分析的重要确认方法，与LC-MS/MS 结果互为补充，因此在法医毒物学实验室仍然占有一席之地。

液相色谱-质谱联用（LC-MS）。液相色谱（LC）和质谱（MS）联用，包括MS/MS和HRMS，具有比GC-MS 更高的选择性和灵敏度，特别适用于复杂组分体系且干扰严重的样品中低含量组分分析测定，在DMS 微样分析中的应用潜力巨大。经过优化后，液相色谱可以根据分析物的物理化学性质将其分离开，从而可以通过质谱对其进行单独检测和定量。

二、样品处理方法

1.离线提取

离线提取的一般步骤为：将加入抗凝剂的全血、尿液或唾液等点到卡纸上，室温放置2～3 h 晾干，再从卡纸上打下一个至多个一定直径的圆孔，将打孔的斑点转移到试管或多孔设备中，然后采用合适的溶剂（如甲醇、乙腈、一定比例的水-有机溶剂）提取斑点。必要时可采用超声或涡旋来增加提取效率。将提取后的溶液进行离心操作，取上清液在室温氮气流下蒸发至干燥， 再用流动相复溶，最后进样进行分离分析。

2.在线提取

传统的DMS 样品处理需要手动打孔、提取样品、加入内标和去除杂质等步骤，最后再通过LCMS/MS 系统进行分离分析。手动操作自动化程度较低，繁琐和耗时，特别是当需要制备大量样品时，将严重影响样品的通量，并可能成为DMS 技术应用的障碍，因此样品在线提取和在线分析的全自动化技术应运而生。在线提取和分析涉及从卡纸上直接流动提取/洗脱干燥样品，然后通过LC-MS 系统进行分离和检测的程序，而不需要事先进行任何离线样品处理或手动打孔。现在最多可以全自动方式处理500 张DBS 卡，减少了由于手动操作带来的误差，进一步提高了检测结果的准确性和重现性，实现精准检测。

三、具体应用

干血点（DBS）采样较传统的静脉采样有明显的优势，通过脚后跟或手指穿刺采血，取样简单，损伤较小，这对某些弱势群体（如儿童或老年患者）来说是一种优势;酶失活而增加了分析物的稳定性，从而便于运输和储存，并降低成本;血液吸附和干燥过程中，大多数致病因子被灭活，操作者在处理DBS 样本时更加安全，可将HIV/AIDS和其他传染性病原体的感染风险降至最低;此外，DBS 可简化样品制备程序，并且适用于样品处理和分析的自动化。干生物基质点（DMS）是通过将微量液体（如血液、尿液和唾液等）收集于卡纸上并干燥后形成的样本采集和储存形式。基质效应是复杂样品中农药残留分析的主要挑战。这取决于仪器、基质的类型和数量、样品预处理程序以及分析物的类型和浓度。DMS 微样技术已成功应用于挥发性毒物，农药，心血管药物和滥用物质等，且在滥用物质分析方面的应用较为普遍。我们可以将体积吸收微量取样（VAMS）与LC-MS/MS 联用，建立了一种简便、可行的测定DUS、干血浆点（DPS）和DSS 中卡西酮类物质的新方法，并成功地应用于卡西酮类物质滥用的鉴定实践。VAMS 是药物定量生物分析领域的一项重大进步，可以对体育比赛中合成违禁药物进行可靠的评估。此外，DMS微样技术还可用于疑似药物、毒物影响下驾驶能力的判断，通过新生儿筛查确定母亲是否摄毒等。随着科技水平不断提高，DMS 微样技术将在法庭科学和兴奋剂检测领域具有更广阔的发展前景。干生物基质点微样技术在法医毒物学领域有很好的应用前景。与常规采样方法相比，使用DMS的优势在于它需要的样品体积少，方便采集，并能简化样品前处理;卡纸载体运输和储存比液态血液、尿液、唾液等更可取; DMS 卡纸较血液、尿液、唾液所需的防漏容器占用更少的空间，可简单地将DMS 卡纸置于信封中并通过常规邮件发送至实验室，而且DMS 卡纸不需要额外的预防措施来应对可能的生物危害风险;此外，DMS 基质中药物稳定性较好，可有助于在室温下长期保存样品。DMS 分析作为一种微量采样技术，尚有待进一步完善，但是与传统的采样技术相比所显示出的优点使其在法医毒物学领域中有着良好的应用前景，成为近年来的国际法医毒物学年会中关注的研究热点之一。

参考文献：

[1]法医毒物检验中毒物的快速筛查与检测[J].胡艳祥.世界最新医学信息文摘，2018（22）.

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