刘 宁，崔梅英，王明月，杨泽斌，王 浩，毛 禹，方楷漪，夏 薇，关新刚

(北华大学医学技术学院，吉林 吉林 132013)

类弹性蛋白样多肽(elastin-like polypeptide，ELP)是一种由基因工程设计合成的非免疫原性且无热原性的具有良好生物相容性的蛋白质聚合物[1-2]，ELP主要是由五肽重复序列单元构成，即Val-Pro-Gly-Xaa-Gly(VPGXG)，其中Xaa是除脯氨酸以外的任一种氨基酸[3-5].ELP具有可逆相变循环(Inverse transitioncycling，ITC)的特性，即温度低于其相变温度，ELP多肽以高度可溶的形式存在于水溶液中；若温度高于其相变温度，ELP开始聚集，形成不溶物聚集体，且该过程可逆[6].由于ELP具有的这种特殊性质，在大肠杆菌中高产量表达的ELP蛋白可以利用可逆相变的特性进行快速纯化[7].红色荧光蛋白(mCherry)是SHANER等[8]将发色基团mRFP进行位点突变得到的一种单体红色荧光蛋白[9]，mCherry的荧光强度高且稳定性好[10].KALIMUTHU等[11]将含有mCherry基因的慢病毒颗粒转染人间充质干细胞，表达红色荧光mCherry基因，用生物发光成像法追踪间充质干细胞在荷瘤小鼠中的迁移.

在本研究中，基于ELP蛋白的独特优势及mCherry的荧光成像特性，我们构建了ELP-mCherry原核表达载体，表达纯化了ELP-mCherry融合蛋白，探讨了其与人肾上皮细胞HEK293T和小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3细胞的相容性，为设计开发新型的荧光示踪组织工程材料奠定了基础.

1 材料与方法

1.1 细胞、主要仪器和试剂

pET28a-ELP和pEGFP-N1-mCherry质粒(Origene公司，美国)；限制性内切酶XbaI与XhoI(生工生物工程(上海)有限公司)；大肠杆菌BL21菌株为本实验室保存菌株；HEK293T细胞、NIH3T3细胞复苏自本实验室冻存细胞；胰蛋白胨、酵母提取物、卡那霉素、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)(生工生物工程(上海)有限公司)；……