孙燕燕，李昕，林密，李峰松，包艳芳，陈夏辉，杨光，曾巧英，蒋韬

Pt-Pd合金纳米颗粒标记口蹄疫A型病毒抗体检测的免疫层析方法

孙燕燕1,2，李昕2，林密2，李峰松1,2，包艳芳2，陈夏辉2，杨光2，曾巧英1，蒋韬2

1甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070；2中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/口蹄疫国家参考实验室，兰州 730046

【】为建立一种新型、高灵敏度，可直观与定量分析的快速检测方法，本研究创新使用具有氧化还原酶活性的合金纳米材料，将其作为标记物制备免疫层析试纸。待反应结束，使用TMB显色剂对免疫反应进行级联放大，可以显著提高检测的灵敏度，不仅可直观判断，也可精确定量分析，这为免疫层析技术标志物筛选与敏感性提高开拓了新的思路与方法。采用超声水浴法，通过抗坏血酸（AA）还原K2PtCl4和Na2PdCl4成功出制备Pt-Pd合金纳米颗粒，将其用于标记口蹄疫A型纯化抗原FMDV-146S，作为捕获抗原纳米标记物，再将纯化的A型表达抗原及其抗体（FMDV-146S-Ab）包被在硝酸纤维素膜（NC）上，分别作为检测线（T线）和质控线（C线），经条件优化，建立口蹄疫A型病毒抗体Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条检测方法。对该免疫层析检测技术进行方法学考核，检测结果定量分析并建立标准曲线，同时与LPB-ELISA进行结果比对。该试纸条可在10 min内完成定性和定量检测，定量检测灵敏度为1:28/test，线性范围 1:26/test—1:29/test；检测A型FMDV阳性血清，敏感性为98%，检测FMDV阴性血清、O型和Asia 1型的FMDV阳性血清以及其他动物常见病毒病阳性血清，特异性为94.8%；该试纸条重复检测效果良好；……