孙晓东，周 珍，曾 炼，谢丽霞，杜凯丽，桑 明,2*

1湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院，襄阳 441000；2湖北医药学院 武当特色中药研究湖北省重点实验室，十堰 442000

白藜芦醇(resveratrol，RES)，是一种非黄酮类的多酚化合物，广泛存在于葡萄、花生等植物以及虎杖等中药材，作为低毒性的天然药物发挥抗炎、抗氧化、抗血小板聚集、抗动脉粥样硬化等作用，此外，白藜芦醇也是一种很有前景的抗肿瘤药物[1-3]。它的靶点广泛，如mTOR、JAK、β-amyloid、Adenylyl cyclase、IKKβ、DNA polymerase，也是一种特异性的SIRT1活化剂和有效的孕烷X受体(PXR)抑制剂[4,5]。新近研究发现，RES对多种肿瘤具有体内外抑制活性[6-9]，但RES作为一种抗癌药物的临床试验还是很有限，在肿瘤动物模型中测试RES的研究结果表明，RES对胃肠道肿瘤主要发挥预防作用。而在乳腺癌动物模型中RES有可能成为癌症治疗剂，然而，这种有益作用取决于动物和细胞类型[10]。RES对于人类HPV病毒感染的宫颈癌模型发挥什么样的作用，相关报道较少。本研究主要利用HeLa细胞在裸鼠皮下成瘤，检测RES在体内的抑癌效应，通过检测RES在宫颈癌细胞自噬方面发挥的作用，从体内外两方面探讨RES通过促进细胞自噬性死亡抑制宫颈癌的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂与仪器

细胞培养及研究所用的DMEM(11965-092)、胰酶(25300054)(Gibco公司，美国)；二甲基亚砜(DMSO，D2650)、Trizol试剂(93289-100ML)(Sigma公司，美国)；逆转录酶(M1705)、RNA酶抑制剂(N2511)(Promega公司，美国)；SYBR Green PCR Mix(1725204)(Bio-Rad公司，美国)；Rabbit Anti-LC3 Polyclonal Antibody(abs127815)、Rabbit anti-p62/SQSTM1 Polyclonal Antibody(abs143300)、Rabbit Anti-TMEM49 Polyclonal Antibody (abs126424)、Rabbit Anti-Beclin 1 Polyclonal Antibody(abs122672)(爱必信生物科技有限公司，中国)；细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒(C0003)、Ad-GFP-LC3B(C3006-1ml)、Ad-mCherry-p62(C3016-1ml)、Ad-mCherry-GFP-LC3B(C3011-1ml)、Mito-Tracker Red CMXRos(C1049-50 μg)、HRP标记的山羊抗兔二抗(A0208)、山羊抗小鼠二抗(A0216)(碧云天生物科技有限公司，中国)；SpectraMax i3x酶标仪(Molecular Devices公司，美国)；Ⅸ70倒置荧光显微镜(Olympus公司，日本)；……