杨 帆，孟章进，姜桂英，钱志鸿，王志明

(1.中国石化江苏油田分公司工程技术研究院，江苏 扬州，225009；2:江苏省油气微生物工程研究中心，江苏 扬州，225009)

微生物人工培养和自然条件下的生理特性有很大的不同，影响合成代谢产物能力的因素也有相当大的差异，其中培养基对微生物的各种代谢活动的影响最为显著［1-2］，培养基的成分对菌体生长繁殖、产物的生物合成、产品的分离及产品质量和产量都有重要影响，除此之外，温度、pH 值、装液量等操作条件也是影响微生物生长的因素［3-4］。因此，微生物培养条件的优化非常重要。N411 是一株高温除硫菌，为提高该菌的培养效能，提高发酵水平，从温度、pH 值、摇瓶装液量3 个因素着手，开展了工业发酵培养基和发酵条件研究。

1 材料与方法

1.1 发酵培养基优化

按照表1 的组成成分设计发酵培养基，比较不同配方条件下N411菌株的生长增殖情况，以确定合适发酵生产的培养基。

表1 发酵配方设计 g

1.2 检测方法

比浊法:取一定量摇瓶液，稀释不同倍数后，用紫外分光光度计测定波长为600 nm 的吸收值（OD600）。

平板菌落计数法:取摇瓶液1 mL，分别稀释至10～5、10～6、10～8倍（由预试验得出），取0.1 mL的稀释菌液涂布于固体培养基平板上，培养1 d 后，计算摇瓶液中的活菌数。

细菌数（CFU/mL）=平板上菌落数×稀释倍数／平板上加菌液的量（mL）。

pH 检测:定期取样，以4.0～9.0 精密pH 试纸检测。

2 结果与分析

2.1 除硫菌的发酵培养基优化研究

2.1.1 发酵培养基碳源筛选

以XSN 为基本氮源，保持质量浓度10 g/L 和其他基础培养基成分配比……